茜素紅S染色試劑盒茜素紅 S（Alizarin Red S）染色試劑中的茜素紅 S 可通過與鈣離子和其他金
屬離子發(fā)生鰲和反應(yīng)而形成可以在顯微鏡下直接觀察的帶顏色的復(fù)合物,。本產(chǎn)品就是基于此原理而開發(fā)

茜素紅S染色試劑盒具有下列特點：

1． 即開即用，用戶不需要單獨準備各種溶液,。
2． 操作簡捷,，性能穩(wěn)定，顯色清晰,。
3． 可用于組織切片中的鈣沉積,，尤其適用于骨細胞或組織的病理和生理研究。
4． 可用于檢測動物原生代或培養(yǎng)細胞的鈣沉積。
5． 本產(chǎn)品為通用型,，不但用于鈣離子的檢測,，還可用于 FeCl2和 CdCl2的檢測。 規(guī)格及成分 成 份 編 號 小扁盒包裝
茜素紅 S 染色液 121105A 100 mL（棕色塑料瓶）
茜素紅 S pH 調(diào)節(jié)液 121105B 10 mL
使用手冊 121105sc 1 份
運輸及保存 常溫運輸和保存,，有效期一年,。 自備試劑 光學(xué)顯微鏡、乙醇,、丙酮,、二甲苯
使用方法 注意：試劑具有腐蝕性，操作時須帶手套,。實驗時可以用含金屬離子的切片或培養(yǎng)
細胞作為陽性對照,。可溶性蛋白會干擾茜素紅 S 與鈣的相互作用,，所以樣品必須
經(jīng)過固定處理（以去除細胞中的可溶性蛋白）,。對培養(yǎng)細胞，還必須洗滌去掉培養(yǎng)
基（含血清等蛋白成分）,。茜素紅 S 與鈣的螯合反應(yīng)需要在水相發(fā)生,，因此加入茜
素紅 S 前zui用水溶液洗滌掉前面操作所殘留的有機溶劑。
一：茜素紅 S 染色液的準備
1. 根據(jù)所需檢查的金屬離子按下表選擇茜素紅 S 染色液的* pH,。
金屬離子 * pH 呈現(xiàn)的顏色
CaCl2,，CaPO4、CaCO3 4.28-6.75 橙紅
FeCl2 5.62-8.05 深紫
CdCl2 5.11-5.78 品紅
2. 用茜素紅 S pH 調(diào)節(jié)液將茜素紅 S 染色液調(diào)到所需的 pH 值,。
二：染色載片上細胞
3. 用緩沖中性福爾馬林,、福爾馬林-乙醇混合液或乙醇作為固定劑固定鋪在載玻
片上的細胞（本試劑盒不提供上述固定劑）。
4. 將細胞放入 95%乙醇中處理,。
5. 將載玻片在空氣中干燥,。
6. 將載玻片放在裝有茜素紅 S 染色液的染色缸中染色 1-5 分鐘。注意：此步需
要密切控制,，zui每隔一分鐘放在顯微鏡下檢測,，*時間隨樣品中鹽離子的
多少不同而不同。
7. 用蒸餾水洗滌載片一次,。
8. 用丙酮浸泡載波片 30 秒,。
9. 用丙酮-二甲苯混合液（50：50）浸泡浸泡載波片 15 秒。
10. 肉眼可見紅色或紫色（取決于所檢查的離子）即可終止染色,，放光學(xué)顯微鏡觀
察。鈣沉積陽性細胞將呈現(xiàn)桔紅色,。
三：染色石蠟包埋切片
11. 按常規(guī)方法進行固定,、包埋、切片、脫蠟和水化等操作,，直到 70%乙醇處理
這步,。注意：固定劑zui使用 4%的副甲醛或 10%福爾馬林，切片厚度zui
在 0.4 um,。
12. 將切片浸入蒸餾水中,。
13. 將切片浸泡在茜素紅 S 染色液中 30 秒-5 分鐘，具體時間以肉眼或顯微鏡下
可見桔紅色斑點為準,。
14. 用濾紙吸盡染色液后浸入丙酮 20 次,。
15. 再進入丙酮-二甲苯混合液（50：50）20 次。
16. zui后用二甲苯處理并用封固劑封片,。
四：染色細胞培養(yǎng)（zui是 26 或 6 孔培養(yǎng)板培養(yǎng)的細胞,，便于在顯微鏡下觀察）
17. 小心抽去培養(yǎng)液，注意不要吸走細胞,。
18. 沿壁上緩慢加入 1-2 mL 自備的 1×PBS 或 HBSS 緩沖液,，然后再小心將加
入的液體吸出。
19. 每孔中加入自備的無水乙醇直到全部覆蓋細胞,，室溫放置 30 分鐘后小心移棄
無水乙醇,，室溫晾干。此步用于固定細胞,。也可用 10%甲醛代替無水乙醇,，
但固定時間只需要 15 分鐘，同時還需要用蒸餾水洗滌 3 次才能進入下一步,。
每次洗滌時,，先加入蒸餾水，再浸泡 5-10 分鐘,，然后小心吸走蒸餾水,。注意：
操作時不要破壞細胞單層。
20. 每個細胞培養(yǎng)孔中加入 1mL 茜素紅 S 染色液,，在室溫下孵育至少 20 分鐘,，
zui后小心吸走茜素紅 S 染色液。
21. 加入 1 mL 蒸餾水,，然后小心吸走蒸餾水,。此為洗滌步驟。注意：洗滌一定不
要震蕩以避免形成的鈣沉積物脫落,。
22. 重復(fù)上步操作 3 次（共洗滌 4 次）,。
23. 樣品可立即用于顯微鏡檢測。有鈣沉積的細胞將呈現(xiàn)桔紅色,。 相關(guān)信息 茜素紅 S(alizarin red S,； sodium alizarin sulfonate)是橙黃色的針狀體,，
CAS 號是 130-22-3，分子式為 C14H7NaO7H2O,，分子量為 360.28,，中文別
名是茜素紅、茜素磺酸鈉,、茜素 S,、酸性媒介茜素紅、酸性媒介紅 S-80（Acid
Mordnat Reds-80）和 C.I.媒介紅 3（C.I.Mordant Red 3）,。溶于水,，微溶于醇，
不溶于氯和苯,。1%水溶液 pH 為 2.15,。由茜素經(jīng)發(fā)煙硫酸磺化，然后轉(zhuǎn)變?yōu)?br />鈉鹽制得,。茜素紅能和許多金屬離子生成穩(wěn)定的紅色絡(luò)色物,，在分析中常用作金
屬指示劑；也可以作為酸堿指示劑,，其*變色范圍 pH 值 3.7（黃）～5.2（紫）,，
第二變色范圍 pH 值 10.1（紫）～12.0（淺黃）。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 茜素紅 S 定量檢測試劑盒