詳細介紹
人細小病毒B19PCR檢測試劑盒引起的典型疾病是傳染性紅斑和急性關節(jié)病,但該病毒在一些血液病和免疫受損病人可引起再生障礙危象,,在妊娠婦女可引起胎兒水腫乃至死胎,。PCR 是檢測傳染性疾病的主流技術,本產(chǎn)品就是以 PCR 技術為基礎開發(fā)的專門檢測人細小病毒 B19 的試劑盒
人細小病毒B19PCR檢測試劑盒具有下列特點:
1. 即開即用,,用戶只需要提供病毒 DNA 模板,。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,,便于區(qū)分假陰性樣品,。
4. 特異性高,引物是根據(jù)人細小病毒 B19 高度保守的 VP1 區(qū)設計,。
5. PCR mix 中含上樣染料,,PCR 后可以直接上樣電泳。 規(guī)格及成分 成 份 編號 十孔盒包裝
PCR MagicMix 3.0(含染料) 90805 1 mL
細小病毒 B19 專一性引物對 Yw14051406 100 uL
陽性對照原液
(10E10 拷貝/uL)
Yw14071407 10 uL
超純水 100935 1 mL
使用手冊 11-3090sc 1 份
運輸及保存 低溫運輸,,-20℃保存,,保存期限為 12 個月。 自備試劑 樣品 DNA,。 使用方法 一,、樣品 DNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 DNA,。注意:可以選用本公司的一管式病毒
DNAout 或柱式病毒 DNAout 產(chǎn)品,。
二、陽性對照
2,、為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對
照,只提供沒有傳染性的,、可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對照,。
3、用本試劑盒的陽性對照原液稀釋制備陽性對照工作液時,,由于陽性對照原液
濃度非常高,,一定要注意不要污染本試劑盒的其他試劑和成分。zui在專門
的區(qū)域操作,。陽性對照工作液的濃度不得低于 10 拷貝/uL,,建議濃度為 1000
拷貝/uL。
三,、PCR(25 uL 體系)
4,、樣品管:在 PCR 管中加入下列成分:
成 份 樣品 陽性對照 陰性對照
細小病毒 B19 專一性引物對 2 uL 2 uL 2 uL
待測樣品 DNA 1-5 uL 無 無
陽性對照工作液 無 2 uL 無
補超純水到 12.5 uL 12.5 uL 12.5 uL
即用型 PCR Mix 3.0 12.5 uL 12.5 uL 12.5 uL
四、PCR 反應參數(shù)
過程 溫度 時間
預變性 94℃ 5 min
PCR 反應
(35 個循環(huán))
94℃ 0.5 min
50℃ 0.5 min
72℃ 0.5 min
zui后延伸 72℃ 10 min
五,、電泳檢測
5,、取 10-20 uL PCR 產(chǎn)物直接在 PAGE 或瓊脂糖凝膠上電泳(不需要使用 DNA 上樣液),zui使用 100 bp DNA Marker,,產(chǎn)物的大小為 400 bp,。 關聯(lián)產(chǎn)品 綠如藍核酸染料預染配膠液
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