沙門氏菌invA 基因熒光PCR檢測(cè)試劑盒（探針法）沙門氏菌（Salmonella）引起的中毒病例在世界各地的食物中毒病例中所占數(shù)量比例非常高,。在我國(guó),，70-80%細(xì)菌性食物中毒事件是由沙門氏菌引起的，沙門氏菌的檢測(cè)已成為食品質(zhì)量安全監(jiān)控的必檢衛(wèi)生指標(biāo)

沙門氏菌invA 基因熒光PCR檢測(cè)試劑盒(探針法)?沙門氏菌（Salmonella）引起的中毒病例在世界各地的食物中毒病例中所占數(shù)量比例非常高,。在我國(guó),，70-80%細(xì)菌性食物中毒事件是由沙門氏菌引起的，沙門氏菌的檢測(cè)已成為食品質(zhì)量安全監(jiān)控的必檢衛(wèi)生指標(biāo),。本試劑盒就是針對(duì)沙門氏菌腸毒素 stn 基因設(shè)計(jì)特異性引物,，利用實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)開發(fā)的沙門氏菌檢測(cè)試劑盒，它通過熒光染料實(shí)時(shí)顯示樣品模板 DNA 的量,，并通過坐標(biāo)曲線表示出來,，結(jié)果直觀準(zhǔn)確

沙門氏菌invA 基因熒光PCR檢測(cè)試劑盒(探針法)?沙具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，用戶只需要提供樣品模板,，操作簡(jiǎn)單,，定量準(zhǔn)確快速。
2. 熒光定量 PCR 檢測(cè),，反應(yīng)特異性強(qiáng),。
3. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷,。
規(guī)格及成分 成分 編號(hào) 50 次塑料袋包裝
2×qPCR Mix 90408 1.0 mL
stn 專一性引物對(duì) yw13891390 200 μL
stn 陽性對(duì)照,，
XXX 10E9 拷貝/μL
yw13911392 100 μL
超純水 100935 1 mL
使用手冊(cè) 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存,，保存期限一年,。
自備試劑 樣品等
使用方法 一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品 DNA,。注意：DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的
關(guān)鍵因素,。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢
測(cè)靈敏度,。
二,、制備 stn 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃
度非常高,，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,，千萬不能污染樣品或本
試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,，本產(chǎn)品不提供
活體病毒做陽性對(duì)照,，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽
性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 6,，5，4,，3,，2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（好用帶芯槍頭,，下同）,。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到
10E7 拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7
拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍,，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),，充分震
蕩 1 分鐘,，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭,，從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5
拷貝/μL 的陽性對(duì)照,。
6. 換槍頭,，從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6
個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照,。
7. NC 管中不加任何陽性對(duì)照,。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個(gè)
樣品做 3 次重復(fù),。PCR 后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,，
并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
三、PCR 檢測(cè)（20 μL 體系）
1. 在 PCR 管中加入下列成分（待測(cè)樣品需要做三次重復(fù),，下表只列出一次）：
成分 樣品 陰性對(duì)照 陽性對(duì)照
2×qPCR Mix 10 μL 10 μL 10 μL
待測(cè)樣品 DNA 模板 1-5 μL 無 無
stn 陽性對(duì)照,，XXX 10E9 拷貝/
μL
無 無
5 uL（每個(gè)
管加一個(gè)
稀釋度的
對(duì)照）
自備 10×ROX (見注) 2 μL 2 μL 2 μL
stn 專一性引物對(duì) 2 μL 2 μL 2 μL
補(bǔ)水到 20 μL
注:僅 ABI7500、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照,，其他熒光 PCR
儀器（如 iCycler IQ,、MJ Option、MJ Chromo4,、MX3000,、MX4000、
RotorGene 3000,、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX,。
2. 建議 PCR 反應(yīng)參數(shù)（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）
過程 溫度 時(shí)間
預(yù)變性 93℃ 5 min
PCR 反應(yīng)
（40 個(gè)循環(huán)）
93℃ 35 s
55℃ 45 s
3. 數(shù)據(jù)采集
(探針法)?沙具體操作按所用儀器推薦的流程進(jìn)行,。本產(chǎn)品中所含的熒光染料在不結(jié)合
DNA 時(shí)，zui大吸收光譜在 471 nm,，結(jié)合 DNA 時(shí)的zui大吸收光譜在 500 nm,，
zui大發(fā)射光譜在 530 nm。
四,、數(shù)據(jù)處理
以 stn 陽性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸,，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。再
以待測(cè)樣品濃度的 log 為橫軸,，以 Ct 值為縱軸，通過待測(cè)樣品的 Ct 值計(jì)算出
樣品 DNA 的濃度,。
(探針法)?沙關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 鸚鵡熱衣原體熒光定量 PCR 檢測(cè)試劑盒（CAT#:11-3780）