小反芻獸疫病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒小反芻獸疫(Peste des Petits Ruminants, PPR)是由副黏病毒科麻疹病毒屬的小反芻獸疫病毒( Peste des Petits Ruminants Virus, PPRV) 引起的急性,、烈性傳染病,。
它是世界動物衛(wèi)生組織(OIE)法定的 A 類傳染病,我國將其定為Ⅰ類動物疫病。

小反芻獸疫病毒熒光RT-PCR檢測試劑盒就
是專門用于小反芻獸疫病毒的快速熒光 RT-PCR 檢測的試劑盒,，在動物或者動物產(chǎn)品的
檢測領(lǐng)域有廣泛用途,，

具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒 RNA 模板,。
2. 兩管式 RT-PCR,，一次 RT 反應(yīng)產(chǎn)物可以作為多次 PCR 的模板。本試劑盒提供 5
次的 20 uL 體系的 RT 反應(yīng)試劑和 25 次的 50 uL 體系的熒光 PCR 試劑,。
3. 使用 RNase H 已經(jīng)突變的 SuperMMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶,，減少了 RT 過程中 RNA 的降
解。
4. 使用熱啟動的 Taq DNA 聚合酶,，降低了非特異性擴(kuò)增,。
5. 熒光定量檢測，所含 SYBR Green I 只與雙鏈 DNA 結(jié)合,，反應(yīng)特異性強(qiáng),。適用于
不需要 ROX 做校正染料的熒光 PCR 儀。
6. 產(chǎn)品的有效線性范圍廣,，定量更加準(zhǔn)確,。
7. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性高,，引物是根據(jù)保守的 N 基因設(shè)計,，產(chǎn)物長度為 1416 bp。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 25 次包裝
SuperMMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶 60906A 50 uL
RT Buffer（含 dNTP） 60906B 125 uL
2×熒光 PCR Mix 90408 625 uL
陽性對照(XXng/uL) 100946 50 uL
PPR 專一引物一 YW315-1 50 uL
PPR 專一引物二 YW315-2 60 uL
RNase-free 水 80403 1 mL
使用手冊 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,，-20℃避光保存,，有效期為 6 個月。
自備試劑 樣品 RNA,。
使用方法 一,、樣品 RNA 的制備
1、用自選方法抽提病毒樣品 RNA,。注意：可以選用本公司生產(chǎn)的一管式病毒 RNAout
或柱式病毒 RNAout,。
二：RT（逆轉(zhuǎn)錄）反應(yīng)合成 cDNA
2,、按下表配制 RT 反應(yīng)體系（20 uL 體系）: 
成分 用量
RNA 模板(自備) 由于一般不知病毒 RNA 濃度,用 1-10 uL 即可
PPR 專一性引物二 2 uL
RNase-free 水 補(bǔ)水到 13 uL
70℃保溫 5 分鐘變性模板后立即冰浴,。
RT Buffer(含 dNTP) 5 uL
37℃保溫 5 分鐘
SuperMMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶 2 uL
42℃保溫 60 分鐘,。此步為 RT 反應(yīng)。
70℃保溫 10 分鐘以終止反應(yīng),，然后放置在冰上待用,。合成的 cDNA 可以
直接作為 PCR 模板使用，不需要純化,。
三,、熒光 PCR（50 uL 體系）
3、在 PCR 管中加入下列成分(注:做多少陽性對照稀釋度由客戶自己決定,?？截悢?shù)可以
通過濃度和長度計算而得。本陽性對照長度為 1416bp)：
成分 樣品管 陽性對照(1-8 管) 陰性對照
2×qPCR Mix 25 uL 25 uL 25 uL
cDNA 樣品（上步的 RT 反應(yīng)液） 1-5 uL 無 無
陽性對照(可以稀釋 1-8 個梯度) 無 1-8 個稀釋度 無
PPRV 專一性引物一 2 uL 2 uL 2 uL
PPRV 專一性引物二 2 uL 2 uL 2 uL
補(bǔ)水到 50 uL
4,、PCR 反應(yīng)參數(shù)（以 ABI7500 熒光定量 PCR 儀為參考）：
過程 溫度 時間
預(yù)變性（此步用于活化
熱啟動 Taq 聚合酶）
95℃ 10 min
PCR 反應(yīng)
（35-40 個循環(huán)）
94℃ 1 min
55℃ 1 min
72℃ 2 min
融解曲線分析
95℃ 15 s
60℃ 1 min
95℃ 15 s
60℃ 15 s
5,、 根據(jù)陽性對照梯度的 Ct 值和濃度描出標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于計算樣品的濃度,。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 小反芻獸 RT-PCR 檢測試劑盒（CAT#：11-260）