豬傳染性胃腸炎病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒?豬傳染性胃腸炎(TGE)是由豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)引起的一種急性,、
高度接觸性傳染病。

豬傳染性胃腸炎病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒它主要引起 2 周齡以下仔豬幾乎 100%死亡,，所以
及早確診對(duì)該病的防治具有特別重要的意義,。豬傳染性胃腸炎病毒的傳統(tǒng)診斷
方法主要有病毒的分離鑒定、免疫熒光抗體試驗(yàn),、免疫電鏡觀察和 ELISA 等
方法,。但這些方法操作過(guò)程繁瑣、操作難度大,，所需要時(shí)間較長(zhǎng),，專一性不強(qiáng)
因此建立一種快速、高靈敏度的診斷方法對(duì)防治 TGEV 感染是十分必要的,。
本就是針對(duì)這一需求開發(fā)的實(shí)時(shí)定量 RT-PCR 產(chǎn)品,，它具有下列特點(diǎn)：
1. 靈敏度高，分析靈敏度可以達(dá)到 50 拷貝/uL,，遠(yuǎn)高于細(xì)菌培養(yǎng)法,，也比
常規(guī)的 RT-PCR 檢測(cè)高 100 倍。
2. 特異性高,，根據(jù) TGEV 的 N 基因保守區(qū)設(shè)計(jì)引物,，不會(huì)誤檢其他豬的病
原性病毒（如豬輪狀病毒、豬流行性腹瀉病毒,、豬圓環(huán)病毒,、豬偽狂犬病
毒、豬細(xì)小病毒和豬瘟病毒等）,。
3. 一管封閉式,，避免了 RT-PCR 產(chǎn)物對(duì)后續(xù) RT-PCR 的污染。
4. 線性范圍廣,，在 10-107拷貝/uL 的靶分子濃度范圍內(nèi)均呈線性,。
5. 簡(jiǎn)單快捷，只需要 2 小時(shí)即可得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。

規(guī)格及成分 成 份 50 次塑料袋包裝
即用型熒光 PCR Mix 750 uL
TGEV 專一性引物對(duì) 100 uL
TGEV 陽(yáng)性對(duì)照 50 uL
超純水 1 mL
使用手冊(cè) 1 份

運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,、-20℃保存，有效期一年,。
自備試劑 樣品,。
使用方法 一、樣品 RNA 的制備
用自選方法純化 TGEV 樣品的 RNA,，也可以另購(gòu)本公司的細(xì)菌 RNAout
或柱式細(xì)菌 RNAout,，上述兩款產(chǎn)品跟本試劑盒兼容。
二,、制備 TGEV 標(biāo)準(zhǔn)曲線
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,，分別為 1,2,3,4,5 和 6 號(hào)。
2. 用帶芯分別加入 45 uL 超純水（zui用帶芯槍頭,，下同）,。
3. 在 1 號(hào)管中加入 5 uL TGEV 陽(yáng)性對(duì)照(本試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘。
4. 換槍頭,，從 1 號(hào)管中取 5 uL 溶液到 2 號(hào)管中,，充分震蕩 1 分鐘。
5. 換槍頭,，從 2 號(hào)管中取 5 uL 溶液到 3 號(hào)管中,，重復(fù)上面的操作直到得到
6 個(gè)稀釋度的樣品。
6. 從 6 個(gè)管中分別取 5 uL 進(jìn)行定量 RT-PCR（見(jiàn)下步）,，每個(gè)樣品zui重
復(fù) 3 次,。
三、熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)（30 uL 體系）
7. 在 PCR 管中加入下列成分（每個(gè)樣品zui重復(fù)三次,，這里只列出一次）：
成 份 樣品
6 個(gè)陽(yáng)性對(duì)照（見(jiàn)制
備 TGEV 標(biāo)準(zhǔn)曲
線）
陰性對(duì)照
TGEV 專一性引物對(duì) 2 uL 2 uL 2 uL
樣品 RNA 5 uL 無(wú) 無(wú)
TGEV 陽(yáng)性對(duì)照（XXX 拷
貝/uL）
無(wú)
5 uL（每個(gè)管加一
個(gè)稀釋度的對(duì)照） 無(wú)
自備 1×ROX (見(jiàn)注) 2 uL 2 uL 2 uL
補(bǔ)超純水到 15 uL 15 uL 15 uL
即用型熒光 RT-PCR Mix 15 uL 15 uL 15 uL
注：僅 ABI7500,、7700 和 7900 儀器需要使用 ROX 作為對(duì)照，其他熒光
PCR 儀器（如 iCycler IQ,、MJ Option,、MJ Chromo4、MX3000,、MX4000,、
RotorGene 3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480）不需要使用 ROX,。
此處陰性對(duì)照用的是水,，用戶也可以用其他 RNA 做陰性對(duì)照。
8. 輕柔混勻后上機(jī),，按下面參數(shù)進(jìn)行定量 RT-PCR,，反應(yīng)參數(shù)如下：
過(guò)程 溫度 時(shí)間 其他
RT（逆轉(zhuǎn)錄） 42℃ 5 分鐘
預(yù)變性 95℃ 5 分鐘
PCR 反應(yīng)
（40 個(gè)循環(huán)）
95℃ 5 s
60℃ 20 s
收集熒光數(shù)據(jù)，所
選擇波長(zhǎng)見(jiàn)注,。
溶解曲線分析判斷產(chǎn)
物特異性
加熱到 95℃ 10 分鐘,，然后降低到 55℃后，
按 0.5℃/10s 的升幅將溫度提高到 95℃,，
其間記錄下熒光信號(hào)的變化,。特異的 TGEV
PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物將在 84.5℃產(chǎn)生特異峰。
注：本產(chǎn)品所用熒光染料跟 RNA 結(jié)合時(shí)的zui大光吸收是 500 nm,，zui大發(fā)射
波長(zhǎng)是 530 nm,，不同 PCR 產(chǎn)物（DNA段）結(jié)合時(shí)zui大吸收波長(zhǎng)是 471 nm，
無(wú)發(fā)射,。
四,、數(shù)據(jù)處理
9. 以 TGEV 陽(yáng)性對(duì)照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸,，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
再用濃度的的 log 為橫軸,，以 Ct 值為縱軸，通過(guò)待測(cè)樣品的 Ct 值反推出
樣品 RNA 的濃度,。
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 豬流行性腹瀉病毒 RT-PCR 試劑盒（CAT#：11-200）,。

兔出血癥病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2880
兔黏液瘤病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2860
彎曲桿菌16S rRNA基因熒光PCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)?    11-2890
豌豆內(nèi)源基因PCR檢測(cè)試劑盒    11-2900
偽狂犬病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2910
五種致腹瀉大腸埃希菌的多重PCR檢測(cè)試劑盒    11-2270
戊型肝炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒     11-2280
西尼羅河病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2290
細(xì)小病毒B19 PCR檢測(cè)試劑盒    11-2980
蝦PCR檢測(cè)試劑盒    11-2840
蝦特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒 560    11-2850
腺病毒PCR檢測(cè)試劑盒 570    11-2870
小腸結(jié)腸耶爾森菌PCR檢測(cè)試劑盒11-2940    11-2880
小反芻獸疫病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒11-260（即11-PPRV）    11-260 小反芻獸RT-PCR檢測(cè)試劑盒 V1.1（雙酶一管式）    11-2860
小反芻獸疫病毒熒光RT-PCR檢測(cè)試劑盒11-2950 2990元  11-2950 小反芻獸熒光熒光定量RT-PCR檢測(cè)試劑盒 V1.0（兩步法）    11-2890
小麥PCR檢測(cè)試劑盒11-2960    11-2900
蟹特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒11-2970    11-2910
新城疫病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒11- （11-ND）    11-2270
新城疫病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒 590     590 新城疫病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒 V1.0    11-2280
星狀病毒PCR檢測(cè)試劑盒 600    11-2290
猩紅熱鏈球菌PCR檢測(cè)試劑盒     11-2980
杏仁PCR檢測(cè)試劑盒    11-2840
血清型耶爾森氏菌ail基因常規(guī)PCR檢測(cè)試劑盒11-4560    11-2850
血清型耶爾森氏菌ail基因熒光PCR檢測(cè)試劑盒(探針?lè)?11-457050 T2990元    11-2870
血吸蟲PCR檢測(cè)試劑盒 630    11-2880
鴨肝炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒 640    11-2860
鴨特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒 650    11-2890
鴨瘟病毒PCR檢測(cè)試劑盒 660    11-2900
羊傳染性胸膜肺炎PCR檢測(cè)試劑盒（Movi）    11-2910
羊特定基因序列PCR檢測(cè)試劑盒 670    11-2270
羊偽結(jié)核棒狀桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 680    11-2280
乙型肝炎病毒（HBV）cccDNA PCR檢測(cè)試劑盒     11-2290
乙型肝炎病毒（HBV）cccDNA 熒光PCR檢測(cè)試劑盒    11-2980
乙型肝炎病毒拉米夫定耐藥PCR檢測(cè)試劑盒    11-2840
乙型脊髓灰質(zhì)炎病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2850
乙型流感病毒PCR檢測(cè)試劑盒    11-2870
乙型腦炎病毒RT-PCR檢測(cè)試劑盒     11-2880
鸚鵡熱衣原體PCR檢測(cè)試劑盒     11-2860
幽門螺旋桿菌PCR檢測(cè)試劑盒 790    11-2890
魚PCR檢測(cè)試劑盒 800    11-2900