人穿孔素成孔蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中靶蛋白的的濃度,，其原理見圖2,。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時,，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合,。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后,，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合,，形成夾心的免疫復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin),，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合,，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復(fù)合物連接起來而被固相捕獲,。zui后加入顯色劑TMB溶液，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì),，在加入終止液后呈黃色,。通過酶標(biāo)儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測。靶蛋白濃度與A450值呈正比,，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，對照樣品吸光度值，即可計算出樣品中靶蛋白濃度,。

圖2. 雙抗體夾心ELISA原理圖,。

      一個包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測,，可以進行96次檢測,。
人穿孔素成孔蛋白酶聯(lián)免疫吸附檢測試劑盒包裝清單：
產(chǎn)品編號    產(chǎn)品名稱    包裝
PI305-1    人IL-1β抗體預(yù)包被板    8孔×12條
PI305-2    樣品分析緩沖液    5ml
PI305-3    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液    10ml
PI305-4    人IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品    2-4瓶
PI305-5    人IL-1β生物素化抗體    10ml
PI305-6    辣根過氧化物酶標(biāo)記Streptavidin    10ml
PI305-7    洗滌液(20X)    30ml
PI305-8    TMB溶液    10ml
PI305-9    終止液    5ml
PI305-10    封板膜(透明)    2張
PI305-11    封板膜(白色)    2張
－    說明書    1份
保存條件：
      除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個月內(nèi)有效,。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存,，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效,。注意TMB溶液避光保存,。
注意事項：
      由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn),，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn),。
      洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶,，請室溫水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再配制工作液,。
      為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后,，如果有剩余請勿再次使用,。
      TMB對人體有刺激性，請注意適當(dāng)防護,。
      如果發(fā)現(xiàn)TMB辣根過氧化物酶顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成藍色,，應(yīng)該停止使用。
      加樣時,，請注意每個樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭,，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差,。
      不宜混用不同批號的試劑盒組份,，每批次試劑盒均經(jīng)過獨立測試。
      充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要,，在加液后請輕輕晃動整個96孔板,，以保證混勻,。
      本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃,。溫度低于25℃會導(dǎo)致zui終檢測到的吸光度顯著下降,。
      洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大,。
      檢測標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時建議設(shè)置重復(fù)孔,，以確保檢測結(jié)果的可信度。
      加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生,。
     僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品,，不得存放于普通住宅內(nèi),。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

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