Mouse TNF-α ELISA Kit是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測(cè)小鼠血清,、血漿、細(xì)胞或組織裂解液,、或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的IL-1β的ELISA試劑盒,。
      本產(chǎn)品檢測(cè)靈敏度高，特異性強(qiáng),，重復(fù)性好,。多次重復(fù)檢測(cè)結(jié)果表明，zui小檢出量為2.6pg/ml,，與鼠IL-1α,、IL-1RA、IL-1 RI/Fc Chimera,、IL-1 RII/Fc Chimera,、人IL-1β等均沒有交叉反應(yīng)，板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。
      IL-1即白細(xì)胞介素-1(簡(jiǎn)稱白介1)，其家族由IL-1α(也稱IL-1F1),、IL-1β(也稱IL-1F2),、IL-1受體拮抗劑(IL-1 receptor 
antagonist, 簡(jiǎn)稱IL-1RA, 或IL-1F3)及IL-18、IL-33和IL-1F5~F10組成,。IL-1主要由巨噬細(xì)胞產(chǎn)生,，此外幾乎所有的有核細(xì)胞，如B細(xì)胞,、NK細(xì)胞,、體外培養(yǎng)的T細(xì)胞,、角質(zhì)細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞,、星形細(xì)胞,、成纖維細(xì)胞、中性粒細(xì)胞,、內(nèi)皮細(xì)胞以及平滑肌細(xì)胞均可產(chǎn)生IL-1,。正常情況下只有皮膚、汗液及尿液中含有一定量的IL-1,，絕大多數(shù)細(xì)胞在受到外來(lái)抗原或細(xì)菌內(nèi)毒素刺激后才能合成和分泌IL-1,。IL-1β在免疫和炎癥反應(yīng)、骨重建(bone remodeling),、發(fā)燒,、碳水化合物代謝等生理、病理過(guò)程中都有重要作用,。血液中的IL-1主要是由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞所產(chǎn)生的IL-1β,。
      IL-1α和IL-1β在結(jié)構(gòu)上有一定的相似性并且在氨基酸水平有25%的同源性。兩者由不同的基因分別編碼產(chǎn)生約31kDa大小的前體蛋白,，并分別剪切成約17.5kDa大小的成熟蛋白,。IL-1α的前體蛋白有一定的生物活性，而IL-1β的前體蛋白幾乎沒有生物學(xué)功能,，所以其被Caspase-1/ICE剪切得到成熟的IL-1β是一個(gè)非常關(guān)鍵的步驟,。在大多數(shù)情況下，IL-1α和IL-1β以同樣的親和力結(jié)合于相同的細(xì)胞表面受體,，發(fā)揮相同的生物學(xué)作用,。IL-1有兩種跨膜受體蛋白，一種是分子量約為80kDa的IL-1 RI (IL-1 
receptor, type I),，其主要表達(dá)在T細(xì)胞,、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞,、內(nèi)皮細(xì)胞,、滑膜細(xì)胞、軟骨細(xì)胞及肝細(xì)胞中,；另一種是分子量約為68kDa的IL-1 RII (IL-1 receptor, type II),，其主要表達(dá)在B細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞及骨髓細(xì)胞中,。
      IL-1主要激活NF-κB信號(hào)通路調(diào)控炎癥因子的表達(dá),。IL-1和其受體結(jié)合后，激活下游一系列蛋白如JNK、p38,、ERK1/2,，及NF-κB和c-Jun。IL-1的信號(hào)通路見圖1,。

圖1. IL-1的信號(hào)通路示意圖,。
      Mouse TNF-α ELISA Kit采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測(cè)樣品中靶蛋白的的濃度，其原理見圖2,。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預(yù)包被于酶標(biāo)板上,，當(dāng)加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品時(shí)，其中的靶蛋白會(huì)與捕獲抗體結(jié)合,。當(dāng)加入生物素化的抗靶蛋白抗體后,，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復(fù)合物,。隨后加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin(HRP-Streptavidin),，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會(huì)與夾心的免疫復(fù)合物連接起來(lái)而被固相捕獲,。zui后加入顯色劑TMB溶液,，固相捕獲的辣根過(guò)氧化物酶就會(huì)催化無(wú)色的顯色劑氧化成藍(lán)色物質(zhì),，在加入終止液后呈黃色,。通過(guò)酶標(biāo)儀檢測(cè)450nm處的吸光度值就能實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。靶蛋白濃度與A450值呈正比,，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,，對(duì)照樣品吸光度值，即可計(jì)算出樣品中靶蛋白濃度,。

圖2. 雙抗體夾心ELISA原理圖,。

      一個(gè)包裝的本試劑盒，包括標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè),，可以進(jìn)行96次檢測(cè),。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)    產(chǎn)品名稱    包裝
PI301-1    小鼠IL-1β抗體預(yù)包被板    8孔×12條
PI301-2    樣品分析緩沖液    5ml
PI301-3    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液    10ml
PI301-4    小鼠IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品    2-4瓶
PI301-5    小鼠IL-1β生物素化抗體    10ml
PI301-6    辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記Streptavidin    10ml
PI301-7    洗滌液(20X)    30ml
PI301-8    TMB溶液    10ml
PI301-9    終止液    5ml
PI301-10    封板膜(透明)    2張
PI301-11    封板膜(白色)    2張
－    說(shuō)明書    1份
保存條件：
      除標(biāo)準(zhǔn)品外，4℃保存6個(gè)月內(nèi)有效,。標(biāo)準(zhǔn)品4℃保存,，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個(gè)月內(nèi)有效,。注意TMB溶液避光保存,。
Mouse TNF-α ELISA Kit注意事項(xiàng)：
      由于標(biāo)準(zhǔn)品一般是凍干粉，在制備后需要嚴(yán)格校準(zhǔn),，所以標(biāo)準(zhǔn)品的瓶數(shù)及每瓶標(biāo)準(zhǔn)品所需加入的稀釋液體積請(qǐng)以實(shí)際收到的試劑盒及標(biāo)準(zhǔn)品標(biāo)簽上的標(biāo)注為準(zhǔn),。
      洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶,，請(qǐng)室溫水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再配制工作液,。
      為保證標(biāo)準(zhǔn)品的精確性,，標(biāo)準(zhǔn)品配制使用后，如果有剩余請(qǐng)勿再次使用,。
      TMB對(duì)人體有刺激性,，請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。
      如果發(fā)現(xiàn)TMB辣根過(guò)氧化物酶顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成藍(lán)色,，應(yīng)該停止使用,。
      加樣時(shí)，請(qǐng)注意每個(gè)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品必須更換槍頭,，一方面避免交叉污染,，另一方面也避免吸取體積的誤差。
      不宜混用不同批號(hào)的試劑盒組份,，每批次試劑盒均經(jīng)過(guò)獨(dú)立測(cè)試,。
      充分混勻?qū)ΡＷC反應(yīng)結(jié)果的精準(zhǔn)性很重要，在加液后請(qǐng)輕輕晃動(dòng)整個(gè)96孔板,，以保證混勻,。
      本試劑盒很多操作在室溫進(jìn)行，要求嚴(yán)格控制室溫在25-28℃,。溫度低于25℃會(huì)導(dǎo)致zui終檢測(cè)到的吸光度顯著下降,。
      洗滌過(guò)程非常重要，洗滌不充分會(huì)使精確度下降并導(dǎo)致結(jié)果誤差較大,。
      檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品時(shí)建議設(shè)置重復(fù)孔,，以確保檢測(cè)結(jié)果的可信度。
      加樣過(guò)程中須避免氣泡的產(chǎn)生,。
      本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品,，不得存放于普通住宅內(nèi),。
      為了您的安全和健康，Mouse TNF-α ELISA Kit請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。