Human IL-6 ELISA Kit是一種用于特異性地高靈敏地定量檢測人血清,、血漿,、細胞或組織裂解液,、或細胞培養(yǎng)上清液中的IL-1β的ELISA試劑盒。
      本產(chǎn)品檢測靈敏度高,，特異性強,，重復性好。多次重復檢測結(jié)果表明,，zui小檢出量為2.2pg/ml,，與人IL-1rα、IL-1sRII,、IL-1sRI,、小鼠IL-1α、小鼠IL-1β等均沒有交叉反應,，板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%。
      IL-1即白細胞介素-1(簡稱白介1),，其家族由IL-1α(也稱IL-1F1),、IL-1β(也稱IL-1F2)、IL-1受體拮抗劑(IL-1 receptor 
antagonist, 簡稱IL-1RA, 或IL-1F3)及IL-18,、IL-33和IL-1F5~F10組成,。IL-1主要由巨噬細胞產(chǎn)生，此外幾乎所有的有核細胞,，如B細胞,、NK細胞、體外培養(yǎng)的T細胞,、角質(zhì)細胞,、樹突狀細胞、星形細胞,、成纖維細胞,、中性粒細胞、內(nèi)皮細胞以及平滑肌細胞均可產(chǎn)生IL-1,。正常情況下只有皮膚,、汗液及尿液中含有一定量的IL-1,，絕大多數(shù)細胞在受到外來抗原或細菌內(nèi)毒素刺激后才能合成和分泌IL-1。IL-1β在免疫和炎癥反應,、骨重建(bone remodeling),、發(fā)燒、碳水化合物代謝等生理,、病理過程中都有重要作用,。血液中的IL-1主要是由單核細胞和巨噬細胞所產(chǎn)生的IL-1β。
      IL-1α和IL-1β在結(jié)構(gòu)上有一定的相似性并且在氨基酸水平有25%的同源性,。兩者由不同的基因分別編碼產(chǎn)生約31kDa大小的前體蛋白,，并分別剪切成約17.5kDa大小的成熟蛋白。IL-1α的前體蛋白有一定的生物活性,，而IL-1β的前體蛋白幾乎沒有生物學功能,，所以其被Caspase-1/ICE剪切得到成熟的IL-1β是一個非常關(guān)鍵的步驟。在大多數(shù)情況下,，IL-1α和IL-1β以同樣的親和力結(jié)合于相同的細胞表面受體,，發(fā)揮相同的生物學作用。IL-1有兩種跨膜受體蛋白,，一種是分子量約為80kDa的IL-1 RI (IL-1 
receptor, type I),，其主要表達在T細胞、成纖維細胞,、角質(zhì)細胞,、內(nèi)皮細胞、滑膜細胞,、軟骨細胞及肝細胞中,；另一種是分子量約為68kDa的IL-1 RII (IL-1 receptor, type II)，其主要表達在B細胞,、嗜中性粒細胞及骨髓細胞中,。
      IL-1主要激活NF-κB信號通路調(diào)控炎癥因子的表達。IL-1和其受體結(jié)合后,，激活下游一系列蛋白如JNK,、p38、ERK1/2,，及NF-κB和c-Jun,。IL-1的信號通路見圖1。

Human IL-6 ELISA Kit采用雙抗體夾心ELISA法(Sandwich ELISA)檢測樣品中靶蛋白的的濃度,，其原理見圖2,。靶蛋白特異的單克隆捕獲抗體已預包被于酶標板上，當加入標準品或樣品時，其中的靶蛋白會與捕獲抗體結(jié)合,。當加入生物素化的抗靶蛋白抗體后,，生物素化抗靶蛋白抗體與靶蛋白結(jié)合，形成夾心的免疫復合物,。隨后加入辣根過氧化物酶標記Streptavidin(HRP-Streptavidin),，由于生物素與鏈霉親和素(Streptavidin)可以特異性地結(jié)合，因此鏈霉親和素連接的HRP就會與夾心的免疫復合物連接起來而被固相捕獲,。zui后加入顯色劑TMB溶液,，固相捕獲的辣根過氧化物酶就會催化無色的顯色劑氧化成藍色物質(zhì)，在加入終止液后呈黃色,。通過酶標儀檢測450nm處的吸光度值就能實現(xiàn)定量檢測,。靶蛋白濃度與A450值呈正比，通過繪制標準曲線,，對照樣品吸光度值,，即可計算出樣品中靶蛋白濃度,。

圖2. 雙抗體夾心ELISA原理圖,。

      一個包裝的本試劑盒，包括標準品檢測,，可以進行96次檢測,。
包裝清單：
產(chǎn)品編號    產(chǎn)品名稱    包裝
PI305-1    人IL-1β抗體預包被板    8孔×12條
PI305-2    樣品分析緩沖液    5ml
PI305-3    標準品稀釋液    10ml
PI305-4    人IL-1β標準品    2-4瓶
PI305-5    人IL-1β生物素化抗體    10ml
PI305-6    辣根過氧化物酶標記Streptavidin    10ml
PI305-7    洗滌液(20X)    30ml
PI305-8    TMB溶液    10ml
PI305-9    終止液    5ml
PI305-10    封板膜(透明)    2張
PI305-11    封板膜(白色)    2張
－    說明書    1份
 保存條件：
      除標準品外，4℃保存6個月內(nèi)有效,。標準品4℃保存,，1-2周內(nèi)有效，-20℃保存6個月內(nèi)有效,。注意TMB溶液避光保存,。
注意事項：
      由于標準品一般是凍干粉，在制備后需要嚴格校準,，所以標準品的瓶數(shù)及每瓶標準品所需加入的稀釋液體積請以實際收到的試劑盒及標準品標簽上的標注為準,。
      洗滌液(20X)在低溫下可能有結(jié)晶，如果發(fā)現(xiàn)有結(jié)晶,，請室溫水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再配制工作液,。
      為保證標準品的精確性，標準品配制使用后,，如果有剩余請勿再次使用,。
      TMB對人體有刺激性，請注意適當防護,。
      如果發(fā)現(xiàn)TMB辣根過氧化物酶顯色液出現(xiàn)混濁或顏色變成藍色,，應該停止使用。
      加樣時，請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭,，一方面避免交叉污染,，另一方面也避免吸取體積的誤差。
      不宜混用不同批號的試劑盒組份,，每批次試劑盒均經(jīng)過獨立測試,。
      充分混勻?qū)ΡＷC反應結(jié)果的精準性很重要，在加液后請輕輕晃動整個96孔板,，以保證混勻,。
      本試劑盒很多操作在室溫進行，要求嚴格控制室溫在25-28℃,。溫度低于25℃會導致zui終檢測到的吸光度顯著下降,。
      洗滌過程非常重要，洗滌不充分會使精確度下降并導致結(jié)果誤差較大,。
      檢測標準品和樣品時建議設(shè)置重復孔,，以確保檢測結(jié)果的可信度。
      加樣過程中須避免氣泡的產(chǎn)生,。
      僅限于專業(yè)人員的科學研究用,，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品,，不得存放于普通住宅內(nèi),。
      為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。