詳細(xì)介紹
上海雅吉生物的乳酸脫氫酶細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit),也稱乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒(LDH Assay Kit)或乳酸脫氫酶釋放檢測(cè)試劑盒(LDH Release Assay Kit),,是一種基于diaphorase催化的INT顯色反應(yīng),,通過(guò)比色法檢測(cè)細(xì)胞毒性時(shí)釋放的乳酸 脫氫酶活性或檢測(cè)其它樣品中的乳酸脫氫酶活性的試劑盒。
本試劑盒可以用于常規(guī)的乳酸脫氫酶活性的檢測(cè),,更常用于以LDH釋放為指標(biāo)的細(xì)胞毒性檢測(cè),。同時(shí),基于細(xì)胞總?cè)樗崦摎涿富钚缘臋z測(cè),,本試劑盒也可以用于檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè),。
細(xì)胞凋亡或壞死而造成的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的破壞會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞漿內(nèi)的酶釋放到培養(yǎng)液里,其中包括酶活性較為穩(wěn)定的乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH),。通過(guò)檢測(cè)從質(zhì)膜破裂的細(xì)胞中釋放到培養(yǎng)液中的LDH的活性,,就可以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞毒性的定量分析。LDH釋放被看做細(xì)胞膜完整性的重要指標(biāo),,并被廣泛用于細(xì)胞毒性檢測(cè),。LDH釋放被認(rèn)為是以前使用放射性的51Cr標(biāo)記細(xì)胞,隨后通過(guò)51Cr釋放進(jìn)行 細(xì)胞膜完整性檢測(cè)的安全有效的替代方法,。
乳酸脫氫酶細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒的基本原理是,,在乳酸脫氫酶的作用下,NAD+被還原生成NADH,,NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-
nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脫氫酶(diaphorase)催化反應(yīng)生成NAD+和強(qiáng)生色物甲臜(formazan),,在490nm波長(zhǎng)下產(chǎn)生吸收峰,從而可以通過(guò)比色來(lái)定量乳酸脫氫酶的活性,。吸光度與乳酸脫氫酶活性成線性正相關(guān),。該酶聯(lián)反應(yīng)原理的示意圖如下:
可檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液、細(xì)胞裂解液等樣品中乳酸脫氫酶的活性,。一個(gè)試劑盒可進(jìn)行100次檢測(cè),。
包裝清單:
產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱 包裝
C0016-1 LDH釋放試劑 1.5ml
C0016-2 乳酸溶液 2ml
C0016-3 酶溶液 1ml×2
C0016-4 INT溶液(10X) 0.2ml
C0016-5 INT稀釋液 2ml
— 說(shuō)明書 1份
保存條件:
-20℃保存,一年有效,。C0016-3需注意避免反復(fù)凍融,。C0016-4需避光保存。試劑盒解凍后可以短期4℃存放,,2-3天內(nèi)有效,。
注意事項(xiàng):
冷凍會(huì)使樣品中部分乳酸脫氫酶失活,4℃可放置2-3天,。建議樣品準(zhǔn)備好后盡量當(dāng)天完成測(cè)定,。
如果檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中的乳酸脫氫酶,,由于血清含有乳酸脫氫酶,建議血清的使用濃度不要超過(guò)1%,,并使用熱滅活血清,。如果一定需要使用10%血清,在檢 測(cè)時(shí)一定要設(shè)置沒有細(xì)胞,,但加入了相同體積培養(yǎng)液的對(duì)照孔,,以用于消除背景。
細(xì)胞過(guò)度生長(zhǎng),、密度過(guò)高,、離心速度過(guò)大、培養(yǎng)箱內(nèi)外溫差過(guò)大,,都會(huì)造成細(xì)胞釋放乳酸脫氫酶增加,。
如果希望進(jìn)行乳酸脫氫酶活性的定量,用戶需自備乳酸脫氫酶標(biāo)準(zhǔn)品,。
僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,,不得存放于普通住宅內(nèi),。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。