上海雅吉生產(chǎn)的His標簽蛋白純化試劑盒(His-tag Protein Purification Kit),，俗稱鎳柱試劑盒,，是一種采用了新型的
BeyoGold™ His-tag Purification Resin的可以兼容還原劑和螯合劑,，并能簡單,、快速、高效并且高特異性地純化His標簽蛋白的試劑盒,。
      His標簽蛋白純化試劑盒提供了His標簽蛋白所需的相關(guān)試劑和親和層析柱空柱管,，為His標簽蛋白的純化帶來了極大的便利。
      通常帶有6個組氨酸標簽的重組蛋白(6xHis-tagged recombinant protein)或帶有6個以上連續(xù)組氨酸標簽的重組蛋白,，被稱為His標簽蛋白,。蛋白樣品溶液通過BeyoGold™ His-tag Purification Resin時，重組蛋白His標簽上的組氨酸殘基能特異性地結(jié)合到BeyoGold™ His-tag Purification Resin中的鎳離子上,，其它蛋白則不能被結(jié)合,。洗滌后，His標簽重組蛋白可在非變性條件下被洗脫,，從而被分離純化,。
      BeyoGold™ His-tag Purification Resin對His標簽重組蛋白的親和力強、選擇性高,、結(jié)合容量大,，可以獲得高純度的His標簽重組蛋白，可用于簡單,、快速,、高效地純化細菌、哺乳動物細胞,、昆蟲及桿狀病毒等多種表達系統(tǒng)中表達的His標簽重組蛋白,。純化的蛋白可以用于結(jié)構(gòu)和功能研究、抗體制備、蛋白與蛋白相互作用,、蛋白與核酸相互作用等方面的研究,。
      BeyoGold™ His-tag Purification Resin采用了一種高度交聯(lián)的6%瓊脂糖凝膠(Sepharose CL-6B)為基質(zhì)，并使用了進一步優(yōu)化的接臂和鎳離子螯合技術(shù),，和目前市售的大多數(shù)Ni-NTA agarose或類似產(chǎn)品相比,，非特異性蛋白結(jié)合顯著降低，耐受壓力強,，鎳離子螯合非常穩(wěn)定,。和同類產(chǎn)品相比，本產(chǎn)品由于鎳離子基本不會流失,，重復使用本純化介質(zhì)時不需要重新裝載鎳離子,。
      Ni-NTA agarose以及絕大多數(shù)類似的鎳柱產(chǎn)品不能耐受蛋白樣品中常見濃度的還原劑如二硫蘇糖醇(DTT),、β-巰基乙醇等以及常見濃度的螯合劑如EDTA等,，但BeyoGold™ His-tag Purification Resin可以很好地耐受DTT等還原劑以及EDTA等螯合劑。本產(chǎn)品可耐受20mM DTT等還原劑,，以及20mM EDTA等螯合劑,。這為需要添加還原劑或螯合劑的蛋白樣品的純化提供了可能性。本產(chǎn)品不兼容8M尿素和6M鹽酸胍,。對于包涵體蛋白的純化,，在采用8M尿素或6M鹽酸胍溶解蛋白的情況下，需要通過透析去除尿素和鹽酸胍后才能使用本產(chǎn)品進行His標簽蛋白的純化,。
      BeyoGold™ His-tag Purification Resin已經(jīng)螯合了鎳離子,，呈藍色，凝膠的顆粒直徑為45-165μm,?？赡褪艿膠ui大壓力為0.025MPa，約合5.8psi,。采用固定流速進行蛋白純化時的推薦流速為0.5ml/min,。
      BeyoGold™ His-tag Purification Resin可以高容量、高特異性地結(jié)合His標簽蛋白,。zui大蛋白結(jié)合量為20-30mg蛋白/毫升凝膠,。實際使用時的zui大結(jié)合量取決于待純化的His標簽重組蛋白的分子量大小，分子量越大則zui大結(jié)合容量越大,，分子量越小則zui大結(jié)合容量越小,。對于分子量為50kD的蛋白，每毫升凝膠的實際zui大純化量約為6-10mg,，對于分子量為100kD的蛋白,，每毫升凝膠的實際zui大純化量約為12-20mg。但對于分子量相同的蛋白，也會因為蛋白本身特性的不同,，結(jié)合的zui大容量也會有所不同,。
      BeyoGold™ His-tag Purification Resin儲存在30%乙醇中，10ml總體積中5ml為凝膠,，5ml為液體,，需要充分重懸后再吸取。
      一個包裝的本產(chǎn)品足夠進行10次His標簽重組蛋白純化,，每次細菌沉淀的濕重約為1克,。每次蛋白的zui大純化量為10-15mg，具體的zui大純化量和蛋白分子量有關(guān),；對于分子量為50kD的帶有His標簽重組蛋白,，每次的蛋白zui大純化量為3-10mg。在不使用親和層析柱空柱管的情況下,，參考本說明書本試劑盒足夠進行500次的小量His標簽蛋白純化,。
包裝清單：
產(chǎn)品編號    產(chǎn)品名稱    包裝
P2226-1    BeyoGold™ His-tag Purification Resin    10ml
P2226-2    非變性裂解液    120ml
P2226-3    非變性洗滌液    60ml
P2226-4    非變性洗脫液    60ml
P2226-5    溶菌酶    60mg
P2226-6    親和層析柱空柱管(3毫升)    10套
－    說明書    1份
保存條件：
      4℃保存，至少一年有效,。除BeyoGold™ His-tag Purification Resin外,，其余均可以-20℃保存。
注意事項：
      請勿在-20℃或更低溫度冷凍保存BeyoGold™ His-tag Purification Resin,。 
      BeyoGold™ His-tag Purification Resin,。使用過程中，緩沖試劑如Tris,、HEPES,、MOPS等的濃度不宜超過100mM，EDTA濃度不宜超過20mM,，SDS和sarkosyl的濃度不宜超過0.3%,，Triton、Tween,、NP-40的濃度不宜超過2%,，脫氧膽酸鈉、CHAPS的濃度不宜超過1%,，組氨酸濃度不宜超過20mM,，鈣離子濃度不宜超過5mM，鈉離子和鎂離子濃度可以高達2M,，甘油濃度可以高達50%,。其它未提及試劑的兼容性可以參考上述試劑，但還有待實驗驗證,。
      BeyoGold™ His-tag Purification Resin保存和純化過程中應始終保持凝膠濕潤,。
      若離心不能*除去蛋白樣品中的不溶物,，可以將樣品溶液用0.45μm的濾膜過濾。
      蛋白樣品收集后宜盡快完成純化工作,，并應始終放置在4℃或冰浴,，以減緩蛋白降解。為有效抑制蛋白降解,，可以在裂解液中添加適量的蛋白酶抑制劑混合物,。
      若使用本說明書提供的條件無法達到理想的純化效果，可嘗試改變洗滌液和洗脫液中咪唑的濃度和(或)pH,，以達到*效果,。
      僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療,，不得用于食品或藥品,，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。