詳細(xì)介紹
上海雅吉的基因組DNA小量抽提試劑盒(離心柱式)(Genomic DNA Mini Preparation Kit with Spin Column)是目前世界上的基因組DNA抽提試劑盒之一,。可以抽提動(dòng)物組織,、鼠尾,、培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌,、酵母,、動(dòng)物血液、昆蟲以及固定組織的包括基因組DNA在內(nèi)的總DNA,。一個(gè)試劑盒通過說明書中提供的不同操作方法,,可以抽提除植物樣品外的幾乎所有樣品中的總DNA。
樣品首先被蛋白酶K消化,隨后加入適合DNA結(jié)合到純化柱上的緩沖液,,然后加入到純化柱內(nèi),。通過高速離心,使DNA在穿過純化柱的瞬間,,結(jié)合到純化柱上,,隨后通過兩次洗滌去除各種雜質(zhì),zui后通過洗脫液把DNA洗脫下來,。整個(gè)過程無需酚氯抽提,,無需酒精沉淀,樣品裂解后僅需約15分鐘即可完成,。
通過基因組DNA小量抽提試劑盒(離心柱式)純化得到的基因組DNA的長度zui長可達(dá)50kb左右,,平均為30kb左右,zui短為100bp的DNA也可以被純化,。如需獲得更長的基因組DNA,,對(duì)于哺乳動(dòng)物樣品,包括組織或細(xì)胞等,,可以使用(D0061)哺乳動(dòng)物基因組DNA抽提試劑盒,。
通過本試劑盒獲得的總DNA,OD260/OD280的范圍通常在1.7至1.9之間,。
本試劑盒可以抽提少至數(shù)百個(gè)細(xì)胞,,多至25mg組織、0.5-1cm鼠尾,、500萬個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,、20億個(gè)細(xì)菌或5000萬個(gè)酵母。樣品用量過多,,反而會(huì)影響抽提效果,。如果待抽提樣品的DNA含量小于5ng,建議加入適當(dāng)量的carrier DNA,,例如poly-dT或其它對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)沒有干擾的DNA,,也可以加入適當(dāng)量的carrier RNA,例如yeast RNA等,,以改善抽提效果,。
基因組DNA小量抽提試劑盒(離心柱式)的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟抽提得到的總DNA會(huì)含有少量RNA,但如果按照可選步驟加入RNase A,,就可以獲得不含RNA的高純度總DNA,。含有RNA的總DNA可以用于PCR,但對(duì)于某些其它的后續(xù)反應(yīng)可能會(huì)產(chǎn)生一些影響,。
純化柱對(duì)于DNA的zui大容量約為30微克。通常每200萬Hela細(xì)胞或500萬淋巴細(xì)胞可以抽提得到15-25微克總DNA,,每25mg肝,、腦,、腎組織可以抽提得到10-30微克總DNA,每25毫克心,、肺組織可以抽提得到5-10微克總DNA,,每10mg脾組織可以抽提得到5-30微克總DNA,每1.2cm小鼠尾尖或0.3cm大鼠尾尖可以獲得10-25微克總DNA,。
本試劑盒可以抽提50個(gè)樣品的總DNA,。
包裝清單:
產(chǎn)品編號(hào) 產(chǎn)品名稱 包裝
D0063-1 樣品裂解液A 10ml
D0063-2 樣品裂解液B 11ml
D0063-3 洗滌液I 21ml (*次使用前加入7ml無水乙醇)
D0063-4 洗滌液II 16ml (*次使用前加入24ml無水乙醇)
D0063-5 洗脫液 22ml
D0063-6 蛋白酶K 1.1ml
D0063-7 DNA純化柱及廢液收集管 50套
— 說明書 1份
保存條件:
蛋白酶K-20℃保存,其余均室溫保存,。一年有效,。蛋白酶K室溫(15-25℃)存放一周,活力無明顯下降,。
注意事項(xiàng):
抽提細(xì)菌,、酵母樣品時(shí)還需要一些特定的試劑,詳情請(qǐng)參考相關(guān)實(shí)驗(yàn)步驟,。
如需制備不含RNA的高純度總DNA,,需自備RNase A。
溫度較低時(shí)樣品裂解液A或樣品裂解液B中可能會(huì)有沉淀產(chǎn)生,,屬正?,F(xiàn)象。使用前必須檢查一遍,。如有沉淀,,55℃水浴孵育使沉淀溶解,混勻后使用,。
*次使用前洗滌液I需添加7ml無水乙醇,,洗滌液II需添加24ml無水乙醇,混勻,,并在瓶上做好標(biāo)記,。
本試劑盒需使用55℃水浴,請(qǐng)?zhí)崆白骱脺?zhǔn)備,。
除特別說明外,,每次Vortex應(yīng)控制在5-10秒左右。
本試劑盒所有操作均在室溫進(jìn)行,,操作時(shí)無需冰浴,。所有離心也均在室溫進(jìn)行。
廢液收集管在一次抽提中需多次使用,,切勿中途丟棄,。
參考如下使用說明,從某些樣品中抽提總DNA不需要使用樣品裂解液A。
基因組DNA小量抽提試劑盒(離心柱式)僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,,不得用于臨床診斷或治療,,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi),。
為了您的安全和健康,,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。