詳細介紹
上海雅吉生物的質(zhì)粒中量抽提試劑盒(Plasmid Midi Preparation Kit, Plasmid Midiprep Kit)是一種用于從大腸桿菌中進行中量質(zhì)粒快速抽提的離心柱式試劑盒,。
本試劑盒適用于常用的EndA-菌株DH5A,、JM109和XL-1 blue等。對于EndA+菌株如JM110,、BL21(DE3),、TG1和HB101
等,可以順利完成質(zhì)粒抽提,,但從EndA+菌株中抽提獲得的質(zhì)粒會有輕微的核酸酶污染,,如果在內(nèi)切酶緩沖液中37℃孵育1小時會導(dǎo)致質(zhì)粒全部降解。從EndA+菌株中抽提質(zhì)粒時推薦使用D0007S/D0007M 質(zhì)粒小量抽提試劑盒(通用型),、D0020 質(zhì)粒中量抽提試劑盒(通用型)和D0028 質(zhì)粒大量抽提試劑盒(通用型),。
野生型大腸桿菌中表達Endonuclease I,能切割并降解雙鏈DNA,。編碼Endonuclease I的基因是endA,,如果endA突變失活,,其基因型會被標注為endA1,相應(yīng)的突變菌株被稱為EndA-菌株,,而野生型菌株則被稱為EndA+菌株,。常見的EndA-和EndA+菌株參見附表1。從EndA+菌株中抽提的質(zhì)粒,,微量核酸酶和質(zhì)粒結(jié)合而容易被共純化,,導(dǎo)致容易降解。
采用了一種新型的離子交換柱,。在特定條件下,,使質(zhì)粒能在離心過柱的瞬間,結(jié)合到質(zhì)粒純化柱上,,在一定條件下又能將質(zhì)粒充分洗脫,,從而實現(xiàn)質(zhì)粒的快速純化。無需酚氯抽提,,無需酒精沉淀,,12個樣品只需不足60分鐘即可完成。
無需高速冷凍離心機,,只需普通臺式高速離心機,。所有操作均可在1.5ml離心管中完成。
每個質(zhì)粒純化柱可以結(jié)合的質(zhì)粒量的上限約為50微克,。每個純化柱可用于抽提5-10毫升用LB培養(yǎng)過夜的大腸桿菌,。抽提所得質(zhì)粒的OD260和OD280比值一般在1.80左右。抽提獲得的質(zhì)粒量會受質(zhì)??截悢?shù)等因素影響,。抽提獲得的質(zhì)粒DNA的OD260和OD280比值也會因菌種不同等原因而略有波動。
本試劑盒抽提得到的質(zhì)??芍苯佑糜谵D(zhuǎn)染細胞,,DNA測序,PCR,,基于PCR的突變,,體外轉(zhuǎn)錄,轉(zhuǎn)化細菌,,內(nèi)切酶消化等,。
包裝清單:
保存條件:
室溫保存,一年有效,。
注意事項:
*次使用前把試劑盒提供的RNase A全部加到溶液I (懸浮液)中,,混勻,并在瓶上做好標記,。加入RNase A后4℃存放,。
*次使用前在溶液IV (洗滌液)中加入27ml無水乙醇,,混勻,并在瓶上做好標記,。
溫度較低時,,溶液II和溶液III可能會有沉淀產(chǎn)生。使用前必須檢查一遍,。如有沉淀,,37℃水浴加熱溶解,混勻后使用,。溶液II請勿過分劇烈混勻,,否則會產(chǎn)生大量氣泡。
溶液II使用完后,,一定要蓋緊瓶蓋,,防止被空氣中二氧化碳酸化。
溶液II有強堿性,,溶液II和溶液III對人體有刺激性,,操作時請小心,并注意適當防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi),。
本試劑盒所有操作均在室溫進行,,操作時無需冰浴。所有離心也均在室溫進行,。
廢液收集管在一次抽提中需多次使用,,切勿中途丟棄。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,,不得用于臨床診斷或治療,,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi),。
為了您的安全和健康,,請穿實驗服并戴一次性手套操作。