免疫熒光技術的實驗步驟：

一,、準備好試劑與儀器：

磷酸鹽緩沖鹽水,、熒光標記的抗體溶液,、緩沖甘油,、搪瓷桶三只,、有蓋搪瓷盒一只,、熒光顯微鏡、玻片架,、濾紙,、37℃溫箱等。

二,、實驗步驟

1.滴加0.01mol/L,，pH7.4的PBS于待檢標本片上，十分鐘后棄去,，使標本保持一定濕度,。

2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液，使其覆蓋標本,，置于有蓋搪瓷盒內,，保溫一定時間以三十分鐘為參考,。

3.取出玻片，置玻片架上,，先用0.01mol/L,，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L,，pH7.4的PBS三缸浸泡,，每缸三到五分鐘，并不停地搖晃振蕩,。

4.取出玻片,，用濾紙吸去多余水分，但不使標本干燥,，加一滴緩沖甘油,，以蓋玻片覆蓋。

5.立即用熒光顯微鏡觀察,。觀察標本的特異性熒光強度,。

商品屬性：

規(guī)格 50ul 100ul 200ul

產品分類 抗體 / 一抗

英文名稱 ：CRYGN

英文別名 ：CRGN_HUMAN; CRYGN; Gamma-crystallin N; Gamma-N-crystallin; MGC119042; MGC119043; MGC119044; MGC119045.

中文別名 γN-crystallin; γ N-crystallin.

交叉反應 Human, Mouse, Cow

標記 ：Unconjugated

抗體來源 Rabbit

抗體類型：Polyclonal

免疫原：KLH conjugated synthetic peptide derived from human CRYGN

蛋白細胞定位：細胞核,細胞漿,細胞外基質

純化方法：affinity purified by Protein A

亞型：IgG

性狀：Liquid

濃度：1mg/ml

儲存液：0.01M TBS(pH7.4) with 1% BSA, 0.03% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20 °C for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

背景資料 ：

抗體制備過程：

1.材料與試劑

a．提取的動物 Ig

b．弗氏佐劑和弗氏不佐劑

d．實驗動物 兔

e．其它材料及試劑

2,、選擇實驗活體。

3,、進行動物免疫實驗,。

4、試取血樣進行測試,，查看免疫效果,。

5、如果免疫成功,，殺死實驗活體,，采集全部血清。

6,、純化出抗體,。

7、鑒定抗體,。胎牛血清（無菌采制）

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抗體分子標記技術：

（一）原理

當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應,。蛋白質分子可進行鹵化反應的基團主要為殘基,殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中,。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應,。

（二）準備

1.試劑

經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體,；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液,；100g/L三醋酸,；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）,；胺T反應終止緩沖液,；

（三）操作要點

1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行；

2.如果氧化反應損傷蛋白質,，可將抗體與異硫酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；

3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年,；

4.1251標記的抗體,在制備后六周內均可使用(1251的半衰期為59.6天）,；

5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；

6.碘化偶爾會對抗原的抗體結合位點有干擾,因此降低其結合能力,但這種情況很少見,。

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