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商品介紹：
蘋果酸合酶（MS,，EC 4.1.3.2）是屬于轉(zhuǎn)移酶中?；D(zhuǎn)移酶的一類，主要存在于植物和微生物中,。MS是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一,，在MS催化下乙醛酸與乙反應(yīng)生成蘋果酸。

測(cè)定原理：

MS催化乙酰CoA和乙醛酸產(chǎn)生蘋果酸,，同時(shí)生成使無(wú)色的DTNB轉(zhuǎn)變成黃色的TNB,，在 412nm處有特征吸光值。

需自備的儀器和用品：

酶標(biāo)儀,、臺(tái)式離心機(jī),、水浴鍋、可調(diào)式移液器,、96孔板,、研缽、冰,、和蒸餾水

產(chǎn)品名稱：蘋果酸合酶（MS）可見(jiàn)分光光度法測(cè)試盒
規(guī)格 : 50管/48樣
測(cè)試方法: 可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào)：GOY-01S6595
分類：乙醛酸循環(huán)系列

試劑的組成和配制
提取液一：液體50mL×1瓶,，4℃保存。
提取液二：液體50mL×1瓶,，4℃保存,。
試劑一：粉劑×1瓶，-20℃保存,；臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,，用不完的試劑4℃保存；
試劑二：液體18μL×1瓶,，4℃保存,；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,，用不完的試劑4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶,，-20℃保存,；臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用，用不完的試劑4℃保存,；
試劑四：液體50mL×1瓶,， 4℃保存；
測(cè)定步驟
1,、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零,。
2,、 將試劑一、二,、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘,。
3、 加樣表：

樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,，加入1mL提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴,，200W，破碎3s,，間歇7s,，總時(shí)間1min），然后4℃,，8000g離心10min,，取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本,，加入1mL提取液一）,，冰浴勻漿后于4℃，200g離心5min,，棄沉淀,，取上清在4℃，8000g離心10min,，取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性,，取沉淀加1mL提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴,，200W,，破碎3s,，間歇7s，總時(shí)間1min）,，然后4℃,，8000g離心10min，取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性,。
建議測(cè)定總FBP酶活性,，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP,，則按照步驟②提取粗酶液,。
FBP活性計(jì)算：
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。
FBP（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積,，1×10-3 L；ε：NADPH摩爾消光系數(shù),，6.22×103 L / mol /cm,；d：比色皿光徑，1cm,；V樣：加入樣本體積,，0.1 mL；V樣總：加入提取液體積,，1mL,；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min,；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度,，mg/mL；W：樣本質(zhì)量,，g,。
【友情提示】：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測(cè),。避免給您帶來(lái)不必要的損失,，請(qǐng)仔細(xì)閱讀購(gòu)買說(shuō)明！
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