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產(chǎn)品名稱:堿性蛋白酶可見(jiàn)分光光度法測(cè)試盒
規(guī)格 : 50管/24樣
測(cè)試方法: 可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào):GOY-01S6623
分類:蛋白酶系列
商品介紹:
AKP是指在堿性條件下催化蛋白質(zhì)肽鍵水解的酶類,,屬于絲氨酸蛋白酶,。此外,該酶還能夠水解酯鍵,、酰胺鍵,,具有轉(zhuǎn)酯及轉(zhuǎn)肽的功能。該酶是主要工業(yè)用酶之一,,廣泛應(yīng)用于制藥、絲綢,、食品,、制革等行業(yè)。
測(cè)定原理:
在堿性條件下,,AKP水解酪蛋白生成酪氨酸,;在堿性條件下,酪氨酸還原磷鉬酸生成鎢藍(lán),;鎢藍(lán)在680nm有特征吸收峰,,測(cè)定680nm吸光度增加速率,來(lái)計(jì)算AKP活性,。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀,、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋,、磁力攪拌器,、可調(diào)式移液槍、0.5 mL EP管和蒸餾水,。
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,,4℃保存,。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存,;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,,4℃保存,;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存,;
試劑三:粉劑×1瓶,,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,,用不完的試劑4℃保存,;
試劑四:液體50mL×1瓶,, 4℃保存;
測(cè)定步驟
1,、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零,。
2,、 將試劑一、二,、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘,。
3、 加樣表:
![圖2.jpg 圖2.jpg](https://img73.chem17.com/6fd5d5abffebbb9ee0327440cf20a8da16673b608148826cf3e0d36e1a4bd8f052dcff23e0c013fb.jpg)
樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,,200W,,破碎3s,間歇7s,,總時(shí)間1min),,然后4℃,8000g離心10min,,取上清測(cè)定,。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),,冰浴勻漿后于4℃,,200g離心5min,棄沉淀,,取上清在4℃,,8000g離心10min,取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性,,取沉淀加1mL提取液二,,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,,破碎3s,,間歇7s,總時(shí)間1min),,然后4℃,,8000g離心10min,取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性,。
建議測(cè)定總FBP酶活性,,按照步驟①提取粗酶液,,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液,。
0酸化驅(qū)動(dòng)蛋白樣蛋白1抗體 內(nèi)皮細(xì)胞纖溶酶原激活抑制蛋白1抗體
EB病毒核抗原-3B抗體 內(nèi)皮細(xì)胞特異性分子1抗體
內(nèi)皮素B受體抗體 內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白激酶抗體
附睪蛋白酶抑制蛋白 內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白激酶B3抗體
外生性骨疣樣蛋白2抗體 內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白激酶A抗體(腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白4)
活性氧檢測(cè)試劑盒DCFHDA200T
肌氨酸氧化酶 10 KU/瓶
肌鈣蛋白cTnl試劑盒 R1:30ml×1 R2:10ml×1 膠乳增強(qiáng)
肌酐Cr測(cè)試盒化學(xué)法,,除蛋白 100管/96樣 比色法
肌酐Cr測(cè)試盒肌氨酸氧化酶法 96T 微板法
堿性蛋白酶可見(jiàn)分光光度法測(cè)試盒地霉屬 雪白根霉
戊糖乳桿菌 絲球毛霉
光滑念珠菌KTCC0001凍干粉 巧克力微桿菌
頭狀絲孢酵母 卷枝毛霉
抗輻射鏈霉菌 沙保羅瓊脂平板70mm
FBP活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位,。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),,6.22×103 L / mol /cm,;d:比色皿光徑,1cm,;V樣:加入樣本體積,0.1 mL,;V樣總:加入提取液體積,,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,,5 min,;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,;W:樣本質(zhì)量,,g。