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詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖：
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
100T | GOY-F10225 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
保存：置4℃,。 工作量：100 張切片,。 有效期：一年,。 所謂原位雜交是指借助于核酸分子雜交的方法,，在顯微鏡水平檢測和定位特異的核苷酸片段?，F(xiàn)在原位雜交已成為在分子水平研究腫瘤和遺傳性疾病的發(fā)生,，發(fā)展和調(diào)控等根本性問題的有力工具，其作用是免疫組化所無法代替的,。具有敏感性特高,，操作簡便和結(jié)果準(zhǔn)確的優(yōu)點。該試劑盒用于 mRNA的雜交,，不推薦使用每個探針分子僅標(biāo)記一個的寡核苷酸探針,。 如果使用 cDNA 探針，應(yīng)在雜交之前變性探針,。 試劑盒中內(nèi)容： 1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml,； 2．預(yù)雜交液 2ml； 3.寡核苷酸探針雜交液 2ml,； 4.封閉液 5ml; 5.化鼠抗 5ml; 6．SABC-FITC 100ul(1:100) |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理,。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,，用移液器吸打幾次,。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細(xì)胞數(shù),。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染,。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞，每5-10×106動物,、植物,、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol，反復(fù)吸打,。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解,。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘,，使核酸蛋白復(fù)合物*分離,。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪,，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉,，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清,。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜,，多糖，高分子量DNA,，上清中含有RNA,。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除,。取澄清的勻漿液進行下一步操作,。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒,，室溫放置3分鐘,。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相,，上層為無色水相和一個中間層,。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅,。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后,。用異丙沉淀水相中的RNA,。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,，離心前看不出RNA沉淀,，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀。移去上清,。
三0酸腺苷酶 英文名稱： Adenosine iphosphate 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： ATP 3-Amino-5-mercapto-1,2,4-triazole 16691-43-3 中文名：3-氨基-5-巰基-1,2,4-三唑 分子式：C2H4N4S 度：98.0%
三0酸脫氧核苷酸混合溶液 10x0.5ml Amoxapine 中文名：阿莫沙平 分子式：C17H16ClN3O 度：98.0%
三(羥甲基)基鹽酸鹽 100g 3-Amino-4-methylbenzamide 19406-86-1 中文名：3-氨基-4-甲酰胺 分子式：C8H10N2O 度：98.0%
腮腺炎病毒(MuV)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T 3-Amino-4-hydroxybenzoic acid 1571-72-8 中文名：3-氨基-4-羥基苯甲酸 分子式：C7H7NO3 度：98.0%
瑞氏－姬姆薩復(fù)合染液 Vascular permeability test solion 3-Amino-3-phenylpropionic acid 614-19-7 中文名：C9H11NO2 分子式：C9H11NO2 度：98.0%
N-乙酰-DL-甲硫 N-Acetyl-DL-mine 質(zhì)量規(guī)格：0.99 人α羥基脫氫酶(αHBDH)ELISA檢測試劑盒Humanα-HydroxybyrateDehydrogenase,αHBDHELISAKit 96T/48T
DL-高半胱 DL-Homocysteine 質(zhì)量規(guī)格：0.95 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子B(VEGF-B)試劑盒 Rat Vascular Endothelial cell Growth Factor B,VEGF-B ELISA kit
間氟-DL-酪 m-Fluoro-DL-tyrosine 質(zhì)量規(guī)格：0.99 英文名稱RatFree-TestoteroneELISAKit大鼠游離睪同(Free-Testoterone)規(guī)格：96T/48T
鈣蛋白酶抑制劑I(進口) Calpain Inhibitor I(ALLN) 質(zhì)量規(guī)格：≥95%,美國進口 革蘭氏陽性細(xì)菌基因組DNA化試劑盒20
DL-丙氨酰-DL-丙 DL-Ala-DL-Ala 質(zhì)量規(guī)格：0.97 ELISAKitHBxAg人乙型肝炎病毒X抗原規(guī)格：48T/96T
DL-丙氨酰-DL-正纈 DL-Alanyl-DL-norvaline 質(zhì)量規(guī)格：0.99 小鼠金屬硫蛋白1(MT-1)ELISA試劑盒 ,，英文名： MT-1 ELISA Kit
3-(1-萘基)-L-丙 3-(1-Naphthyl)-L-alanine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 大鼠0脂酶A2(PL-A2)ELISA檢測試劑盒RatPhospholipidaseA2,PL-A2ELISAKit 96T/48T
Fmoc-3-(2-萘基）-D-丙 Fmoc-3-(2-Naphthyl)-D-alanine 質(zhì)量規(guī)格：0.98 人促胰液素/分泌素受體(SR)試劑盒 Human secretin receptor,SR ELISA Kit
L-瓜 L-Citrulline 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR RatsecretedphospholipaseA2,sPLA2ELISAKit大鼠分泌型0脂酶A2(sPLA2)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Fmoc-L-瓜 Fmoc-L-Citrulline 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR HPV7(HUMANPAPILLOMAVIRUS-7)病毒標(biāo)準(zhǔn)曲線定量PCR擴增檢測試劑盒2
敏感性加強型原位雜交檢測試劑盒Ⅴ(FITC)組織冠狀病毒3C類（SARS -CoV 3C-like PROTEASE）活性
熒光淬滅法定量檢測試劑盒
細(xì)胞冠狀病毒3C類（SARS -CoV 3C-like PROTEASE）活性
體液人類巨細(xì)胞病毒（HCMV PROTEASE）活性熒光淬滅法
血液人類巨細(xì)胞病毒（HCMV PROTEASE）活性熒光淬滅法
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
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