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詳細(xì)介紹
DNA提取流程圖：
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
MitoOrange | 100μL | GOY-F10182 |
產(chǎn)品詳細(xì)介紹：
具有細(xì)胞膜滲透性的MitoOrange（分子量427.4）探針包含一個溫和的巰基反應(yīng)性氯甲基基團(tuán),，可用于標(biāo)記線粒體，并在固定之后保留在線粒體內(nèi),。標(biāo)記線粒體,，細(xì)胞可以與MitoOrange 探針簡單孵育，探針通過被動擴(kuò)散傳過質(zhì)膜,，并在有活性的線粒體內(nèi)富集。一旦線粒體被標(biāo)記,，細(xì)胞再用醛基類固定劑固定之后,，就可以進(jìn)一步做下游實(shí)驗(yàn)的深入處理。這些MitoOrange 染料可以解決一些致病性細(xì)胞上研究所面臨的困難,，因?yàn)闃?biāo)記線粒體可以在細(xì)胞被固定之前開展,。 雖然傳統(tǒng)的熒光染料，如四甲基羅丹明和羅丹明123,，很容易識別功能性線粒體,，但是這些染料一旦在線粒體去極化時(shí)也很容易被洗滌出線粒體。這些缺點(diǎn)限制了常規(guī)染色實(shí)驗(yàn)中所用的醛類固定劑,，以及一些實(shí)驗(yàn)用的處理藥品的選擇,。而MitoView 染料可以很好的解決這一問題。 濃度：0.5mM in DMSO 儲存：-20℃,，避光,，有效期6個月 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅,。
b.單層培養(yǎng)細(xì)胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細(xì)胞,，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml，用移液器吸打幾次,。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,，不取決于細(xì)胞數(shù),。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染。
c．細(xì)胞懸液 離心收集細(xì)胞,，每5-10×106動物,、植物、酵母細(xì)胞或1×107細(xì)菌細(xì)胞加入1ml TRIzol,，反復(fù)吸打,。加TRIzol之前不要洗滌細(xì)胞以免mRNA降解。一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞需用勻漿儀處理,。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘,，使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì),，脂肪,，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘,，取上清,。離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜，多糖,，高分子量DNA,，上清中含有RNA。處理脂肪組織時(shí),，上層有大量油脂應(yīng)去除,。取澄清的勻漿液進(jìn)行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,，劇烈振蕩15秒,，室溫放置3分鐘。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘,。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相,，上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅,。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機(jī)相,，進(jìn)一步操作見后,。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,，室溫放置10分鐘,。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘，離心前看不出RNA沉淀,，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀,。移去上清,。
兔補(bǔ)體蛋白3elisa試劑盒 兔補(bǔ)體蛋白3試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 兔補(bǔ)體蛋白3試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔補(bǔ)體蛋白3試劑盒、兔補(bǔ)體蛋白3 elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月,。 4-Bromomethyl-2-cyanobiphenyl 114772-54-2 中文名： 分子式：C14H10BrN 度：98.0% 關(guān)鍵詞：
兔補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISAKit 5-Chloro-4-methoxy-2-oxo-1,2-dihydropyridine-3-carbonitrile 中文名： 分子式：C7H5ClN2O2 度：98.0%
兔半胱酸蛋白酶抑制劑elisa試劑盒 兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒,、兔半胱酸蛋白酶抑制劑elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。 4-Bromomethyl-2-cyanobiphenyl 114772-54-2 中文名： 分子式：C14H10BrN
兔半胱酸蛋白酶抑制劑C 英文名稱： Rabbit Cystatin C 規(guī)格： 48T/96T 英文縮寫： CSTC 4-Oxododecanedioic acid 中文名： 分子式：C12H20O5
兔半胱酸蛋白酶抑制劑/胱抑素C(Cys-C)ELISA試劑盒 5-(1-Piperazinyl)benzofuran-2-carboxamide 183288-46-2 中文名： 分子式：C13H15N3O2
羥基磷灰石 Hydroxyapatite 質(zhì)量規(guī)格：>99%,粒徑20nm RatPhosphorylatedadenosinemonophosphateactivatedproteinkinase,AMPKELISAKit大鼠0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
羥丙基甲基纖維素(粘度11250-21000mPas) Hydroxy Propyl Methyl Cellulose/HPMC K15M 質(zhì)量規(guī)格：粘度11250-21000mPas GSK-3ALPHA蛋白表達(dá)ELISA定量檢測試劑盒25
羥丙基甲基纖維素 Hydroxypropylmethylcellulose 質(zhì)量規(guī)格：粘度55 - 60 mPa.s MouseTestoterone,TELISA試劑盒小鼠睪同(T)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
羥丙基甲基纖維素(30000 mpa.s) HPMC, hydroxypropyl methyl cellulose 質(zhì)量規(guī)格：30000 mpa.s,BR 小鼠抗增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)ELISA試劑盒 ,，英文名： PCNA ELISA Kit
羥丙基甲基纖維素（4000mpas） HPMC, hydroxypropyl methyl cellulose 質(zhì)量規(guī)格：粘度K4m,，4000 mpa.s 人5脂加氧酶(5-LO/LOX)ELISA檢測試劑盒Human5-lipoxygenase,5-LO/LOXELISAKit 96T/48T
麥芽糖;淀粉糖 D-(+)-Maltose monohydrate 質(zhì)量規(guī)格：>92%,一水物 大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)試劑盒 Rat alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA Kit
ONX-0914 (PR-957) ONX0914;PR957 質(zhì)量規(guī)格：>98%,immunoproteasome抑制劑 英文名稱RatLaminaPropriaLymphocyteELISAKit大鼠脂蛋白脂酶(LPL)規(guī)格：96T/48T
N-壬酰基-N-甲基葡萄糖胺(MEGA9) N-Nonanoyl-N-methylglucamine 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR 高多糖多酚植物組織葉綠體DNA高分離試劑盒10/20
甲基纖維素(100000mPa.s) Methyl cellulose 質(zhì)量規(guī)格：粘度100000mPa.s ELISAKitFT4人游離甲狀規(guī)格：48T/96T
甲基纖維素(4000 mPa.s) Methyl cellulose, middle viscosity 質(zhì)量規(guī)格：4000mPa.s,BR 小鼠抗(AT)ELISA試劑盒 ,，英文名： AT ELISA Kit
線粒體橙色熒光探針組織AURORA-B激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
細(xì)胞AURORA-B激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織AURORA-A激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
細(xì)胞AURORA-A激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織Akt/PKB激酶總活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
實(shí)驗(yàn)步驟
(1)實(shí)驗(yàn)開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可,！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
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