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詳細介紹
DNA提取流程圖：
下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 貨號 |
Super hybrid solution(formamide free) | 100mL | GOY-F10156 |
產(chǎn)品詳細介紹：
核酸雜交一般是指用一種標記的核酸探針與印跡膜上的核酸進行雜交,，由此檢測印跡膜上是否存在與探針同源的核酸分子(靶分子)。核酸雜交是分子生物學的基本技術(shù)之一,，應(yīng)用非常廣泛,。由于核酸雜交效率受印跡膜種類,、雜交溫度,、探針濃度、雜交液離子強度,、雜交液pH及雜交液粘度等因素影響 產(chǎn)品特點： 1. 既可用于Southern雜交(靶分子為DNA),，也可用于和Northern雜交(靶分子為RNA)，還可以用于菌落雜交,，基因芯片等雜交,。 2. 既可以用于同位素探針的雜交，也可以用于非同位素探針的雜交,。 3. 既可以使用DNA(包括DNA Oligo)探針,，也可以使用RNA探針(包括RNA Oligo) 4.含多種能夠促進雜交的聚合物，使雜交反應(yīng)能在6～12小時完成,，而常規(guī)雜交反應(yīng)一般需要12～24小時,。 5.含多種封堵劑，能阻印跡膜對探針分子的非特異性吸附,，能有效降低背景信號,，延長曝光時間以便檢測到低拷貝的RNA(Northern)和單拷貝的基因(Southern)。 6. A型不含甲酰胺,，B型含50%的甲酰胺,。后者使雜交在較低溫度就可以完成，適合Tm 較高的分子雜交(如RNA-RNA和RNA-DNA雜交),。 7.跟各種常用的印跡膜兼容,，包括硝酸纖維素膜和尼龍膜。 儲存條件：低溫運輸,，-20℃保存,，有效期一年。本產(chǎn)品屬于高鹽溶液,，低溫下產(chǎn)生沉淀,，必須在65℃加熱溶解并充分搖勻后才能使用。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理,。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅,。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞，每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,，用移液器吸打幾次,。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定，不取決于細胞數(shù),。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNA有DNA污染,。
c．細胞懸液 離心收集細胞,，每5-10×106動物、植物,、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,，反復(fù)吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解,。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理。
2．將勻漿樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘,，使核酸蛋白復(fù)合物*分離,。
3．可選步驟：如樣品中含有較多蛋白質(zhì)，脂肪,，多糖或胞外物質(zhì)（肌肉,，植物結(jié)節(jié)部分等）可于2-8℃10000×g離心10分鐘，取上清,。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,，多糖，高分子量DNA,，上清中含有RNA,。處理脂肪組織時，上層有大量油脂應(yīng)去除,。取澄清的勻漿液進行下一步操作,。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，劇烈振蕩15秒,，室溫放置3分鐘,。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機相,，上層為無色水相和一個中間層,。RNA主要在水相中，水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅,。
7. 把水相轉(zhuǎn)移到新管中,，如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相，進一步操作見后,。用異丙沉淀水相中的RNA,。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙，室溫放置10分鐘,。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,，離心前看不出RNA沉淀，離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀,。移去上清,。
兔乳鐵傳遞蛋白elisa試劑盒 兔乳鐵傳遞蛋白試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 兔乳鐵傳遞蛋白試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝）,，產(chǎn)品別名：兔乳鐵傳遞蛋白試劑盒,、兔乳鐵傳遞蛋白elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月。 5-Androsten-3β-ol-17-one ethyleneketal 7745-40-6 中文名： 分子式：C21H32O3 度：98.0%
兔乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISAkit 5-Aminouracil 932-52-5 中文名：5-氨基 分子式：C4H5N3O2 度：98.0%
兔(LZM)ELISAKit 5-Aminosalicylic acid 中文名：5-氨基水楊酸 分子式：C7H7NO3 度：98.0%
兔熱休克蛋白90elisa試劑盒 兔熱休克蛋白90試劑盒 規(guī)格型號：96T/48T 兔熱休克蛋白90試劑盒,，規(guī)格型號：96T/48T,，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：兔熱休克蛋白90試劑盒,、兔熱休克蛋白90 elisa試劑盒 保存條件：2-8℃ 保質(zhì)期：6個月,。 5-Benzimidazolecarboxylic acid 15788-16-6 中文名：5-苯并咪唑甲酸 分子式：C8H6N2O2
兔熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒 5-Benzoylpentanoic acid 中文名：5-苯甲酰基戊酸 分子式：C12H14O3
二甲戊樂靈(分析標準品,99%) Pendimethaline 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,99% 大鼠FMS樣酪激酶3(Flt3)ELISA檢測試劑盒RatFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISAKit 96T/48T
氯菊酯(標準品) Permethrin (isomers) solution 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品 人低分子質(zhì)量蛋白7/β型蛋白酶體9(LMP7/PSMB9)試劑盒 Human LMP7/PSMB9 ELISA Kit
殘殺威標準溶液(100μg/ml,u=2%) Propoxur solution 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=2% RatOncostatin-M,OSMELISAKit大鼠抑瘤素M(OSM)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
草甘膦(分析標準品,99.5%) N-(Phosphonomethyl)glycine 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,99.5% FLAG(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升
草甘膦標準溶液(100μg/ml,u=2%) N-(Phosphonomethyl)glycine solution 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=2% MousesinglesandedDNAAibody,ssDNAELISA試劑盒小鼠抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
草甘膦標準溶液(10μg/ml,u=2%) N-(Phosphonomethyl)glycine solution 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=2% 小鼠可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)ELISA試劑盒 ,，英文名： sTM ELISA Kit
(分析標準品,99%) Phoxim 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,99% 大鼠中性粒細胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA檢測試劑盒Ratneuophilactivatingprotein-2,NAP-2ELISAKit 96T/48T
除草醚標準溶液(10μg/ml,u=5%) Nitrofen solution 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=5% 人登革熱抗體IgM(DF-Ab IgM)試劑盒 Human dengue fever aibody IgM,DF-Ab IgM ELISA kit
2-萘氧乙酸(標準品) 2-Naphthoxyacetic acid 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品 RatOrexinAELISAKit大鼠阿立新A(OrexinA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
滅菌丹標準溶液(100μg/ml,u=2%) N-(Trichloromethylthio)phthalimide solution 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=2% FLUORIDE血液抗凝液100毫升
超級雜交液(不含甲酰胺)組織PKCβ2激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
細胞PKCβ2激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織PKCβ1激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
細胞PKCβ1激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
組織PKCα激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可,！固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
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