詳細介紹
DNA提取流程圖:
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中文名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 貨號 |
Fura-2 pentakis ester | 50微升 | GOY-F10143 |
產品詳細介紹:
本品是常用的檢測細胞內鈣離子濃度的熒光探針之一。 用于細胞內鈣離子檢測時,,Fura-2 AM的常用濃度為0.5-5μM,。通常用含有0.5-5μM的Fura-2 AM的適當溶液和細胞一起在4-37℃孵育15-60分鐘,,即可完成熒光探針的裝載。 本Fura-2 AM(鈣離子熒光探針)是配制于無水DMSO(anhydrous DMSO)中的儲存液,,濃度為2mM,。 分子式:C44H47N3O24 分子量:1001.9 Fura-2 AM是一種可以穿透細胞膜的熒光染料,。Fura-2 AM的熒光比較弱,大激發(fā)波長為369nm,,大發(fā)射波長為 478nm,,并且其熒光不會隨鈣離子濃度改變而改變。Fura-2 AM進入細胞后可以被細胞內的酯酶剪切形成Fura-2,,從而被滯留在細胞內,。Fura-2可以和鈣離子結合,結合鈣離子后在330-350nm激發(fā)光下可以產生較強的熒光,,而在380nm激發(fā)光下則會導致熒光減弱,。這樣就可以使用340nm和380nm這兩個熒光的比值來檢測細胞內的鈣離子濃度,可以消除不同細胞樣品間熒光探針裝載效率的差異,,熒光探針的滲漏,,細胞厚度差異等一些誤差因素。Fura-2和鈣離子結合后,,大激發(fā)波長為335nm(大激發(fā)波長隨離子濃度的的不同而有所不同),,大發(fā)射波長為505nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為340nm,,發(fā)射波長為510nm,。如果做雙波長檢測,則推薦使用的激發(fā)波長為340nm和380nm,。Fura-2的激發(fā)光譜參考下圖,,不同曲線表示不同鈣離子濃度時的激發(fā)光譜。 Fura-2相對而言有較強的抗熒光淬滅能力,,在熒光顯微鏡或其它熒光檢測設備上可以連續(xù)檢測1小時而不明顯影響其熒光效果,。 注意事項: 1. 本Fura-2 AM在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底,、管壁或管蓋內,,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。 2. 熒光染料均存在淬滅問題,,請盡量注意避光,以減緩熒光淬滅,。 儲存條件:-20℃,,有效期6個月。 |
操作步驟:
1. 勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,每50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理,。樣品體積不應超過TRIzol體積10℅,。
b.單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,每10cm2面積(即3.5cm直徑的培養(yǎng)板)加1ml,,用移液器吸打幾次,。TRIzol的用量應根據培養(yǎng)板面積而定,,不取決于細胞數(shù)。TRIzol加量不足可能導致提取的RNA有DNA污染,。
c.細胞懸液 離心收集細胞,,每5-10×106動物、植物,、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,,反復吸打。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解,。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理,。
2.將勻漿樣品在室溫(15-30℃)放置5分鐘,使核酸蛋白復合物*分離,。
3.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質,,脂肪,多糖或胞外物質(肌肉,,植物結節(jié)部分等)可于2-8℃10000×g離心10分鐘,,取上清。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,,多糖,,高分子量DNA,上清中含有RNA,。處理脂肪組織時,,上層有大量油脂應去除。取澄清的勻漿液進行下一步操作,。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,,劇烈振蕩15秒,室溫放置3分鐘,。
6. 2-8℃10000×g離心15分鐘,。樣品分為三層:底層為黃色有機相,上層為無色水相和一個中間層,。RNA主要在水相中,,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅。
7. 把水相轉移到新管中,,如要分離DNA和蛋白質可保留有機相,,進一步操作見后。用異丙沉淀水相中的RNA,。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,,室溫放置10分鐘。
8. 2-8℃10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,,離心后在管側和管底出現(xiàn)膠狀沉淀,。移去上清。
兔血栓調節(jié)蛋白(rabbit TM) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進口分裝 4-Chlorotestosterone acetate 中文名:醋酸氯 分子式:C21H29ClO3 度:98.0%
兔血栓素B2elisa試劑盒 兔血栓素B2試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 兔血栓素B2試劑盒,,規(guī)格型號:96T/48T,,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產品別名:兔血栓素B2試劑盒,、兔血栓素B2 elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月,。 7-Acetoxy-4-methylcoumarin 中文名:7-乙酰氧基-4-甲基 分子式:C12H10O4 度:95.0%
兔血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒 5-Fluorouracil 51-21-8 中文名: 分子式:C4H3FN2O2 度:98.0% 關鍵詞:
兔血栓素B2(TXB2)ELISAKit 4-Aminohippuric acid 61-78-9 中文名:4-氨基馬尿酸 分子式:C9H10N2O3
兔血清總補體(CH50)ELISA試劑盒 5-Fluorouracil 51-21-8 中文名: 分子式:C4H3FN2O2
(分析標準品,>99.5%(GC)) Lauric acid 質量規(guī)格:分析標準品,>99.5%(GC) 英文名稱RatHistamineELISAKit大鼠組胺(Histamine)規(guī)格:96T/48T
神經酸(分析標準品,≥99.0%(GC)) Nervonic acid 質量規(guī)格:分析標準品,≥99.0%(GC) 鈣離子膜通道鈣交換體(NCX/線粒體)功能熒光檢測試劑盒20
十五烷酸(分析標準品,≥99.5%(GC)) Pentadecanoic Acid 質量規(guī)格:分析標準品,≥99.5%(GC) ELISAKitTI人真胰島素規(guī)格:48T/96T
泛酸鈣一水合物(標準品) (+)-Pantothenic acid calcium salt hydrate 質量規(guī)格:分析標準品 小鼠粒細胞趨化蛋白2(GCP2)ELISA試劑盒 ,英文名: GCP2 ELISA Kit
山梨酸鉀(標準品) Potassium sorbate 質量規(guī)格:分析標準品 人補體片斷4b(C4b)ELISA檢測試劑盒HumanComplemefragme4b,C4bELISAKit 96T/48T
全氟辛酸(分析標準品, 用于環(huán)境分析) Pentadecafluorooctanoic acid 質量規(guī)格:分析標準品, 用于環(huán)境分析 大鼠血小板衍生生長因子AA(PDGF-AA)試劑盒 Rat Platelet-Derived Growth Factor AA,PDGF-AA ELISA kit
正辛酸(分析標準品,≥99.9%(GC)) n-Octanoic acid 質量規(guī)格:分析標準品,≥99.9%(GC) 英文名稱RatHistamineELISAKit大鼠組胺(Histamine)規(guī)格:96T/48T
蓖麻油酸(分析標準品,99%) Ricinoleic acid 質量規(guī)格:分析標準品,99% 鈣離子膜通道鈣交換體(NCX/質膜)功能熒光檢測試劑盒20
硬脂酸(分析標準品,≥99.5%(GC)) Stearic acid 質量規(guī)格:分析標準品,≥99.5%(GC) ELISAKitMEC/CCL28人粘膜相關上皮趨化因子規(guī)格:48T/96T
甜蜜素(標準品) Cyclamate 質量規(guī)格:分析標準品 小鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF/CSF2)ELISA試劑盒 ,,英文名: GMCSF/CSF2 ELISA Kit
細胞內鈣離子熒光探針(Fura-2 AM)細胞BMK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織BLK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細胞BLK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
組織AX1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
細胞AX1激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)
實驗步驟
(1)實驗開始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可,!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次
(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4℃離心20min
(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V體積的無水乙,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃離心20 min
(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC處理水溶解
(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質量
(在抽提過程中,若蛋白質含量或其它的雜質還較多,可以增加抽提次數(shù))