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上海谷研實業(yè)有限公司>>分子生物學(xué)試劑>>探針標記及檢測>>20微升細胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fluo-3 AM)

細胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fluo-3 AM)

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  • 型號 20微升
  • 品牌 R&D/美國
  • 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
  • 所在地 上海市

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更新時間:2022-04-22 10:34:26瀏覽次數(shù):280

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,,謝謝!

產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 貨號 GOY-F10142
應(yīng)用領(lǐng)域 化工 主要用途 僅供科研使用
細胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fluo-3 AM)公司正*的各種產(chǎn)品組織氧化型甘肽(GSSG)濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒
體液氧化型甘肽(GSSG)濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒
植物氧化型甘肽(GSSG)濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒
細胞甘肽過氧化物酶(GSH PX)活性比色法定量檢測試劑盒
血液甘肽過氧化物酶(GSH PX)活性比色法定量檢測試劑盒

詳細介紹

產(chǎn)品詳細介紹:

本品是常用的檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一。用于細胞內(nèi)鈣離子檢測時,,Fluo-3 AM的常用濃度為0.5-5μM。通常用含有0.5-5μMFluo-3 AM適當溶液和細胞一起在20-37℃孵育15-60分鐘進行熒光探針裝載,,隨后適當洗滌,,洗滌后可以考慮適當再孵育20-30分鐘以確保Fluo-3 AM在細胞內(nèi)*轉(zhuǎn)變成Fluo-3。本Fluo-3 AM (鈣離子熒光探針) 是配制于無水DMSO中的儲存液,,濃度為5mM,。

分子式:C51H50Cl2N2O23

分子量:1129.85

Fluo-3Fura-2相比,其優(yōu)點是:一方面可以被氬離子激光(argon-ion   laser)488nm激發(fā)光激發(fā),,便于檢測,;另一方面,Fluo-3和鈣離子結(jié)合后熒光變化更強,,即對鈣離子濃度變化的檢測更加靈敏,;同時,Fluo-3和鈣離子的結(jié)合能力較弱,,這樣可以比Fura-2檢測到細胞內(nèi)更高濃度的鈣離子水平,;此外,對于細胞內(nèi)的鈣離子的即時變化反應(yīng)得更加準確,,減小了因為和鈣離子解離速度慢而導(dǎo)致的熒光變化滯后,。

注意事項:

1. Fluo-3 AM4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底,、管壁或管蓋內(nèi),,可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。

2. 熒光染料均存在淬滅問題,,請盡量注意避光,,以減緩熒光淬滅。

儲存條件:-20℃,,有效期6個月,。

下列是產(chǎn)品的訂購信息!產(chǎn)品僅用于科研

中文名稱

英文名稱

產(chǎn)品規(guī)格

貨號

細胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fluo-3   AM)

Intracellular   calcium fluorescence probe

20微升

GOY-F10142

 

DNA提取流程圖:
QQ截圖20220414142532.png
實驗步驟
(1)
實驗開始前將RNA提取液于65水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙),(10mL80ul,50mL中加入300ul)
(2)
取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可!固體培養(yǎng)就更好說了),在液氮中迅速磨成精細粉末,裝入50mL離心管,1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻
(3)65
水浴3-10 min,期間混勻2-3
(4)
加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊(25:24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(5)
取上清,等體積的:異戊(24:1)抽提(10,000rpm,4,5 min)
(6)
加入1/4V體積10M LiCl溶液,4放置6h以上(或過夜)
(7)10,000rpm,4
離心20min
(8)
棄上清,500ul SSTE溶解沉淀
(9)
::異戊(25:24:1)抽提兩次,:異戊(24:1)抽提1(10,000rpm,4,5min)
(10)
2V體積的無水乙,-70冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4
離心20 min
(12)
棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)
200ulDEPC處理水溶解
(14)
用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計掃描檢測RNA的質(zhì)量
(
在抽提過程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))
兔血小板活化因子(rabbit PAF)   作用:   ELISA   規(guī)格:   48T/96T   進口分裝  5-Formyl-2-furylboronic acid  27329-70-0  中文名:  分子式:C5H5BO4  度:98.0%  關(guān)鍵詞: 

兔血小板活化因子(rabbit PAF)   作用:   ELISA   規(guī)格:   48T/96T   進口分裝  5-Formamide-1-(2-formyloxyethl)pyrazole  116856-18-9  中文名:  分子式:C7H9N3O3  度:98.0%  關(guān)鍵詞: 

兔血小板活化因子   英文名稱:   Rabbit Platelet Activating Factor   規(guī)格:   48T/96T   英文縮寫:   PAF  4-Hydroxysapriparaquinone  中文名:  分子式:C20H26O4  度:%

兔血纖蛋白原elisa試劑盒   兔血纖蛋白原試劑盒   規(guī)格型號:96T/48T   兔血纖蛋白原試劑盒,,規(guī)格型號:96T/48T,,來源:elisa試劑盒(進口分裝),產(chǎn)品別名:兔血纖蛋白原試劑盒,、兔血纖蛋白原elisa試劑盒   保存條件:2-8   保質(zhì)期:6個月,。  7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carboxylic acid  22252-43-3  中文名:  分子式:C8H10N2O3S 

兔血纖蛋白原(Fbg)ELISAKit                 4-Aminobutyric acid  中文名:4-氨基丁酸  分子式:C4H9NO2
甲基反亞油酸甲酯(分析標準品)  Methyl linolelaidate  質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 ELISAKitITGαM/CD11b人整合素αM型規(guī)格:48T/96T

肉豆蔻酸甲酯(分析標準品,99.5%(GC))  Methyl myristate  質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,99.5%(GC) 小鼠亮酸豐富α2-糖蛋白1(LRG1)ELISA試劑盒 ,英文名: LRG1 ELISA Kit

棕櫚酸甲酯(分析標準品,99.0%(GC))  Methyl palmitate  質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,99.0%(GC) 人不對稱二甲基精(ADMA)ELISA檢測試劑盒Humanasymmeicaldimethylarginine,ADMAELISAKit 96T/48T

亞麻酸甲酯(標準品)  Methyl linolenate  質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 大鼠血小板衍生生長因子B(PDGF-B)試劑盒 Rat platelet-derived growth factor-B,PDGF-B ELISA Kit

十一酸甲酯(標準品)  Methyl undecanoate  質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 英文名稱RatHistoneDeacetylaseELISAKit大鼠組織蛋白去乙?;?/span>(HD)規(guī)格:96T/48T

十九酸甲酯(標準品)  Methyl nonadecanoate  質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 鈣離子膜通道鈣交換體(NCX/內(nèi)質(zhì)網(wǎng))功能熒光檢測試劑盒20

丙二酸(標準品)   Malonate  質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 ELISAKitIegrinαⅤβ3人整合素αⅤβ3規(guī)格:48T/96T

D-異抗壞血酸(標準品)  D-(?)-Isoascorbic acid  質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 小鼠連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)ELISA試劑盒 ,,英文名: CTNNβ1 ELISA Kit

亞油酸(分析標準品,99.0%(GC))  Linoleic acid  質(zhì)量規(guī)格:分析標準品,99.0%(GC) 人補體片斷5b(C5b)ELISA檢測試劑盒HumanComplemefragme5b,C5bELISAKit 96T/48T

隱色結(jié)晶紫(標準品)  Leucocrystal Violet  質(zhì)量規(guī)格:分析標準品 大鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)試劑盒 Rat Platelet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA kit
細胞內(nèi)鈣離子熒光探針(Fluo-3 AM)組織C-KIT激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C

細胞C-KIT激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C

組織BTK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C

細胞BTK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C

組織BMK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C
操作步驟:
1.
勻漿處理:a.組織 將組織在液氮中磨碎,50-100mg組織加入1ml TRIzol,用勻漿儀進行勻漿處理,。樣品體積不應(yīng)超過TRIzol體積10℅
b.
單層培養(yǎng)細胞 直接在培養(yǎng)板中加入TRIzol裂解細胞,,每10cm2面積(3.5cm直徑的培養(yǎng)板)1ml,,用移液器吸打幾次。TRIzol的用量應(yīng)根據(jù)培養(yǎng)板面積而定,,不取決于細胞數(shù),。TRIzol加量不足可能導(dǎo)致提取的RNADNA污染。
c
.細胞懸液 離心收集細胞,,每5-10×106動物,、植物、酵母細胞或1×107細菌細胞加入1ml TRIzol,,反復(fù)吸打,。加TRIzol之前不要洗滌細胞以免mRNA降解。一些酵母和細菌細胞需用勻漿儀處理,。
2
.將勻漿樣品在室溫(15-30)放置5分鐘,,使核酸蛋白復(fù)合物*分離。
3
.可選步驟:如樣品中含有較多蛋白質(zhì),,脂肪,,多糖或胞外物質(zhì)(肌肉,植物結(jié)節(jié)部分等)可于2-810000×g離心10分鐘,,取上清,。離心得到的沉淀中包括細胞外膜,多糖,,高分子量DNA,,上清中含有RNA。處理脂肪組織時,,上層有大量油脂應(yīng)去除,。取澄清的勻漿液進行下一步操作。
5.
每使用1ml TRIzol加入0.2ml,,劇烈振蕩15秒,,室溫放置3分鐘。
6. 2-8
10000×g離心15分鐘,。樣品分為三層:底層為黃色有機相,,上層為無色水相和一個中間層。RNA主要在水相中,,水相體積約為所用TRIzol試劑的60℅,。
7.
把水相轉(zhuǎn)移到新管中,,如要分離DNA和蛋白質(zhì)可保留有機相,,進一步操作見后,。用異丙沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml異丙,,室溫放置10分鐘,。
8. 2-8
10000×g離心10分鐘,離心前看不出RNA沉淀,,離心后在管側(cè)和管底出現(xiàn)膠狀沉淀,。移去上清。


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