產(chǎn)品屬性：

名稱    CIK細(xì)胞
產(chǎn)品概述

CIK細(xì)胞,，即細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(Cytokine-Induced Killer,，CIK)是一種新型的免疫活性細(xì)胞，CIK增殖能力強(qiáng),，細(xì)胞毒作用強(qiáng),，具有一定的免疫特性。

由于該細(xì)胞同時(shí)表達(dá)CD3+和CD56+兩種膜蛋白分子,，故又稱為NK細(xì)胞（自然殺傷細(xì)胞）樣T淋巴細(xì)胞,，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性，和NK細(xì)胞的非MHC限制性殺瘤優(yōu)點(diǎn),。該細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別能力很強(qiáng),，

CIK細(xì)胞可以通過(guò)多機(jī)制抗腫瘤、抗病毒：

1.CIK細(xì)胞能以不同的機(jī)制識(shí)別腫瘤細(xì)胞,，通過(guò)直接的細(xì)胞質(zhì)顆粒穿透封閉的腫瘤細(xì)胞膜進(jìn)行胞吐,，釋放穿孔素、顆粒酶,，實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的裂解,；

2.CIK細(xì)胞能分泌IFN-γ、TNF-α,、IL-2,、IL-6等多種炎性細(xì)胞因子，對(duì)腫瘤也有直接抑制作用；

3.CIK細(xì)胞可以通過(guò)配體-受體（Fas:FasL）介導(dǎo)的方式誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,，因此CIK尤其適用于FasL陽(yáng)性腫瘤的治療,；

4.CIK細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子能顯著刺激初始型T細(xì)胞增殖，有效激活機(jī)體的免疫系統(tǒng),，使之趨于正常,，提高病人自身抗腫瘤的能力。

目前,，腫瘤的發(fā)生機(jī)制尚未形成普遍接受的理論,。研究者普遍認(rèn)可腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與人體的免疫功能密切相關(guān),。即在正常情況下,，腫瘤與機(jī)體的防御機(jī)能之間處于一種動(dòng)態(tài)的平衡，而一旦這種平衡被破壞,，就可能發(fā)生腫瘤,。身體各組織細(xì)胞受到外界化學(xué)、物理,、生物等因素刺激或自身細(xì)胞衰老變異等因素的影響,，使得體內(nèi)某些細(xì)胞發(fā)生突變，成為癌前細(xì)胞,；而機(jī)體免疫功能低下或者由于免疫異常,，無(wú)法及時(shí)識(shí)別、殺傷,、清除這些異常細(xì)胞，突變細(xì)胞在組織內(nèi)復(fù)制生長(zhǎng),，達(dá)到一定數(shù)量后破壞器官功能,，腫瘤即發(fā)生。腫瘤患者,，尤其是惡性腫瘤病人往往免疫功能,、特別是細(xì)胞免疫功能低下，因而疾病呈進(jìn)展,、活動(dòng),、預(yù)后差。因此,，提高機(jī)體免疫力,，建立有效的免疫應(yīng)答是治療腫瘤有希望的途徑。CIK細(xì)胞治療即將大量殺傷性高,、功能強(qiáng),、數(shù)量多的免疫活性細(xì)胞回輸患者體內(nèi)，直接發(fā)揮殺死腫瘤細(xì)胞的作用，并通過(guò)調(diào)節(jié),、激活患者的免疫體系,，調(diào)動(dòng)、提高患者自身的抗腫瘤能力,。

CIK細(xì)胞具有以下突出的特點(diǎn)：

1.增殖速度快,，殺瘤活性高。CIK細(xì)胞可以在體外大量擴(kuò)增,，培養(yǎng)14天可以增殖200倍以上,，其效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD56+的增殖可達(dá)1000倍以上，抗腫瘤活性得以大大增強(qiáng),。

2.殺瘤譜廣,。CIK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷是非MHC限制的，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞均有殺滅作用,。

3.能抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞Fas-FasL凋亡,。CIK細(xì)胞雖然在Fas被占據(jù)后會(huì)引起少量細(xì)胞凋亡，但對(duì)其殺瘤細(xì)胞毒性沒(méi)有明顯影響,；反之,，CIK細(xì)胞可以誘導(dǎo)FasL陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞的凋亡。

4.對(duì)多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感,。CIK細(xì)胞對(duì)放,、敏感的親本細(xì)胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有強(qiáng)大的殺傷活性。

5.CIK細(xì)胞殺瘤活性不受CsA（A）和FK506（普樂(lè)可復(fù)）等免疫抑制劑的影響,。

6.對(duì)正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性小,，僅對(duì)紅系生成產(chǎn)生輕微的抑制，這可能與CIK細(xì)胞自身分泌高水平的IFN-γ有關(guān),。

7.CIK細(xì)胞具有識(shí)別腫瘤的機(jī)制,，特異性強(qiáng)，對(duì)正常的細(xì)胞無(wú)毒性作用,。

8.安全性好,。CIK細(xì)胞是活化的患者自體細(xì)胞，應(yīng)用安全,，不會(huì)產(chǎn)生排斥等反應(yīng),，患者副反應(yīng)小。

冷凍保存細(xì)胞之方法,？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存,。*-20 ℃不可超過(guò)1 小時(shí),， 以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,，惟存活率稍微降低一些,。
培養(yǎng)操作：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻,。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘,，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中,，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）,。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度,。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次,。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化,。
3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面 T25 瓶為類,；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS 清洗一遍后加入 1ml ,，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO,，輕輕混勻,，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml,，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液,，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80 度冰箱,，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
產(chǎn)品僅用于科研一,、分離與培養(yǎng)：
1、無(wú)菌條件下,，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,，然后用PBS將此組織塊清洗2次，后將成1mm3左右大??；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶）,，混懸10s,，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,，自然沉淀并收集上清,，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3,、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液,，混懸10s，置37℃消化10 min后,，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化,；
4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min,，棄去上清,，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶,，放置于37℃ ,，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
5、差速貼壁1h后,，吸出培養(yǎng)基,，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二,、免疫熒光鑒定：
1,、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基,，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,；
2,、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min,，然后在4℃條件下,，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,，每次10min，然后在室溫條件下,，用4% BSA封閉細(xì)胞30min,；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,；
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,，每次10min,，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h,；
6,、用PBS沖洗3次，每次10min,，后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。
細(xì)胞骨架銜接蛋白BIN3抗體

Bcr抗體

磷酸化乳腺癌易感基因1抗體(人)

磷酸化T淋巴細(xì)胞受體抗體

B淋巴細(xì)胞連接蛋白抗體
人γ干擾素(IFN-γ)抗體elisa分析檢測(cè)試劑盒

人γ干擾素(IFN-γ)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人γ分泌素激活蛋白(PION)elisa分析檢測(cè)試劑盒

人γ分泌酶elisa分析檢測(cè)試劑盒

人γ氨基丁酸(GABA)elisa分析檢測(cè)試劑盒
CIK細(xì)胞小鼠肺炎支原體(MP)抗體(IgG)elisa分析檢測(cè)試劑盒

小鼠肺炎支原體(MP)抗體(IgG)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠分化簇抗原30配體(CD30L)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)elisa檢測(cè)試劑盒

小鼠分泌型卷曲相關(guān)蛋白1(SFRP1)elisa檢測(cè)試劑盒