GenomONE® EX仙臺病毒包膜細胞融合試劑
GenomONE®-CF EX含有仙臺病毒包膜和緩沖液,，可促使細胞融合。適用于貼壁或者懸浮狀態(tài)的任何細胞,。
僅僅需要30分鐘就可完成融合細胞及制造混合動力的操作。

GenomONE^® EX仙臺病毒包膜細胞融合試劑

 

　　GenomONE^®-CF EX含有仙臺病毒包膜和緩沖液,，可促使細胞融合,。適用于貼壁或者懸浮狀態(tài)的任何細胞。僅僅需要30分鐘就可完成融合細胞及制造混合動力的操作,。

 

◆用途

●腫瘤疫苗·癌癥免疫研究

●癌細胞和樹突細胞融合等

●再生醫(yī)療·細胞治療研究

●臟器來源細胞和干細胞融合等

●單克隆抗體的制備

●抗原B細胞和髓過氧化物酶細胞融合

●分生·分化·育種研究

●對脫核未受精卵的核移植（核置換）

●其他

●PEG&電融合的使用介紹

 

◆HVJ Envelope（HVJ-E）：

 

　　HVJ包膜是*滅活和純化仙臺病毒（HVJ*）,，即只留下細胞膜融合能力的衣殼蛋白包膜。仙臺病毒的HN蛋白可與細胞膜外的唾液酸受體結(jié)合,，通過F蛋白的作用,，引起細胞膜融合。在HVJ-E中,，仙臺病毒的基因組RNA已經(jīng)*失活,，在人類和實驗動物體內(nèi)不存在感染或增殖。因而不需要特殊的操作和設(shè)備,，它可以安全地在普通的實驗室使用,。

*HVJ：日本仙臺病毒

 

◆HVJ-E細胞融合原理

在低溫（0 - 8℃)條件下,，每一個細胞與數(shù)百個以上的HVJ - E接觸，HVJ - E與細胞膜上的唾液酸受體結(jié)合,，通過細胞表面吸附（步驟1）,，細胞通過HVJ-E相互連接（步驟2），形成細胞彼此聚集的狀態(tài),。當該細胞/ HVJ-E的復(fù)合物加熱到37℃時,，細胞膜干擾就會進一步擴大，細胞膜內(nèi)膜結(jié)構(gòu)也暫時改變,。這種變化是短暫的,，隨后會立即返回到正常結(jié)構(gòu)，但是在這個期間,，細胞膜利用強疏水性結(jié)合力進行相互融合（步驟3）,。

 

步驟一	步驟二	步驟三

 

◆應(yīng)用方法

 

懸浮法	電鍍法

 

◆懸浮細胞融合案例

 

同種細胞融合

異種細胞融合

 

　　熒光標記的紅（* 1）細胞和綠色熒光標記（* 2）細胞（每1.0×10⁵個）在融合緩沖液50 μL混合后，加入HVJ-E冰敷5分鐘,，隨后37℃下反應(yīng)15分鐘后,，融合細胞（黃色）進行了觀察。

 

◆黏著態(tài)和懸浮態(tài)細胞融合案例

 

在粘合狀態(tài)BHK-21（紅）和在浮動狀態(tài)（綠色）的P19細胞的融合

膠粘狀態(tài)的HeLa S3（紅）在浮動狀態(tài)（綠色）的P19細胞的融合

 

　　熒光標記的（* 1）中的紅,，附著的細胞在12孔平板,，綠色熒光標記（* 2）中，添加預(yù)先準備的HVJ-E,，來處理漂浮細胞1×10⁵個的懸浮液（融合緩沖污染）,，并在室溫下離心（1000轉(zhuǎn)），每個板5分鐘,。隨后孵育37℃15分鐘后,，更換增殖用的培養(yǎng)基繼續(xù)細胞培養(yǎng)。觀察3個小時后的融合細胞（黃色）,。

 

◆和PEG法的比較

 

　　紅色熒光標志(* 1）的ratMSC（骨髓由來老鼠間葉系細胞）和綠色熒光標識的老鼠原代培養(yǎng)心肌細胞2×10⁵個融合緩沖液50　μL中混合后,，添加HVJ – E，冰浴5分鐘,，然后37℃孵育反應(yīng)15分鐘,，觀察融合細胞（黃色）。1 - 2日培養(yǎng)后,，觀察到粘著的融合細胞,。在PEG法中融合緊接之后細胞毒性強烈，融合細胞的數(shù)量很少,。

 

◆安全性說明

HVJ-E失活的確認（確認無感染性病毒的存在）

 

1.	細胞增值實驗（熒光灶單元（FFU）法） 處理LLC-MK2細胞,，一到兩天后，病毒生長性的HVJ融合蛋白F抗體通過熒光抗體法測定，已證實未檢測到病毒蛋白,。<制造階段實驗>
2.	受精卵生長試驗（血凝單位測定） 處理受精卵,，3天后的病毒增殖，包括在HVJ表面的HN蛋白的紅血細胞聚合活性（HAU）測量作為指標,，已經(jīng)證實,，沒有看到病毒的生長。<制造階段實驗>
3.	小鼠感染性研究 鼻腔給藥小鼠和未處理小鼠（SIX周）在相同籠中飼養(yǎng),，通過測定血清中的抗HVJ抗體滴度進行了個體之間感染性的檢測,。其結(jié)果是，在非給藥的情況下未觀察到抗體滴度增加,，表明未感染HVJ-E,。
4.	動物個體的遺傳基因?qū)雽嶒?/span> 小鼠、大鼠等實驗動物的各種藥物實驗（肺,、氣管,、肝和靜脈等）。已證實*沒有病毒感染或是可疑的事例,。

 

產(chǎn)品編號	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格
388-18721	GenomONE® -CF 細胞融合試劑套裝（1支套裝）	1 set
384-18723	GenomONE® -CF 細胞融合試劑套裝（4支套裝）	4 sets
382-18724	GenomONE® -CF 細胞融合試劑套裝（16支套裝）	16 sets

GenomONE^® EX仙臺病毒包膜細胞融合試劑