小鼠白介素1可溶性受體Ⅱ試劑盒樣本實驗準備
在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定,。對收集后當(dāng)天就進行
檢測的樣本,，及時儲存在4℃?zhèn)溆谩τ诟籼煸贆z測的樣本,，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆?，有條件的，-70℃凍存?zhèn)溆?。標本?yīng)避免反復(fù)凍融,。
液體類標本: 包括血清、血漿,、尿液,、胸腹水、腦脊液,、細胞培養(yǎng)上清等,。

小鼠白介素1可溶性受體Ⅱ試劑盒

英文名稱：Mouse soluble interleukin-1 receptor Ⅱ,IL-1sRⅡ ELISA KIT

貨號：HD-30079K

性狀：液體 

規(guī)格： 96T 

種屬：Mouse 

樣本類型： serum, plasma, tissue homogenates

所需樣本體積： 50-100ul

檢測波長： 450 nm

反應(yīng)時間： 1-5h

檢測方法：ELISA酶聯(lián)免疫法

檢測范圍： 詳見說明書 

靈敏度： 詳見說明書 

小鼠白介素1可溶性受體Ⅱ試劑盒用途： For research use only. Not for diagnostic or therapeutic

Storage and validity

1．Storage：  2-8℃.

2．validity： six months.

運輸條件：

低溫運輸，用干冰或者冰袋低溫運輸,。 

常見的問題及解答

問：抗原檢測出的分子量比資料上的大,，是怎么回事？

答：a）抗原形成了二聚體,。增多巰基乙醇量,，煮沸變性時間延長，可以打開二聚體,。b）蛋白本身的修飾如：糖基化,，磷酸化等

問：蛋白轉(zhuǎn)移不到膜上,，但膠上有，同時Marker 轉(zhuǎn)上去了,，為什么？

答：可能是：a）樣品濃度過低,；b）轉(zhuǎn)移時間不夠,，。

問：磷酸化抗體的檢測樣本制備時是否一定要加NaF等,？

答：NaF是一種廣譜磷酸化酶的抑制劑,，一般加。但是不加也可以,，大部分時候是不用加的,。

問：要驗證某個細胞上有無該蛋白的存在，需要做免疫組化和western blot試驗嗎,？做這兩個試驗時的一抗和二抗可以共用嗎,？

答：①免疫組化可以用來進行定位，但是不能精確定量,，而且有時會有假陽性,，不易與背景區(qū)分；Western blot可以特異性檢測某個蛋白質(zhì)分子,，進行定量,，但是不能定位。

②兩種實驗的一抗有時候不能通用,，公司的產(chǎn)品說明一般都會說明可以進行什么實驗,，在免疫組化時，是否適合石蠟切片或者冰凍切片,。

問：做Western Blot時,，提取蛋白后凍存（未加蛋白酶抑制劑），用的博士德的一抗,，開始還有點痕跡,，現(xiàn)在越來越差，上樣量已加到120μg,，換了個santa cloz的一抗仍不行,。是什么原因？蛋白酶抑制劑單加PMSF行嗎,？

答：懷疑是樣品問題,，可能是：1，樣品不能反復(fù)凍融,；2,，樣品未加蛋白酶抑制劑,。同時，建議檢查Western Blot過程,，提高一抗?jié)舛?。對于加蛋白酶抑制劑來說，一般加PMSF就可以了,，能多加幾中種蛋白酶抑制劑,。

問：細胞水平要做western blot，多少細胞提的蛋白夠做western blot,？ 

答：一般5×10^6就足夠了

問：同一樣品能同時提RNA又提蛋白么,？這樣對western blot有無影響？ 

答：能,，沒有問題,。

問：同一蛋白樣品能同時進行兩種因子的Western Blot檢測嗎？

答：當(dāng)然可以,，有的甚至可以同時測幾十種樣品,。

問：如果目標蛋白是膜蛋白或是胞漿蛋白，操作需要注意什么,？

答：如果是膜蛋白和胞漿蛋白,，所用的去垢劑要溫和得多，這時加上NaF去抑制磷酸化酶的活性,。

問：我的樣品的蛋白含量很低,，每微升不到1微克，但是在轉(zhuǎn)膜時經(jīng)常會發(fā)現(xiàn)只有一部分蛋白轉(zhuǎn)到了膜上,，就是在轉(zhuǎn)膜后染膠發(fā)現(xiàn)有的孔所有的蛋白條帶都在,，只是顏色變淡了，有什么辦法可以解決,？

答：你可以加大上樣量,，沒有問題，還有轉(zhuǎn)移時你可以用減少電流延長時間,，加20％甲醇,。

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