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了解了胰酶和雙抗,，還怕養(yǎng)不出好細(xì)胞么,？
閱讀：6481 發(fā)布時(shí)間：2019-5-7一說(shuō)到培養(yǎng)細(xì)胞,，胰酶和雙抗是培養(yǎng)過(guò)程中*的一部分,，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)是否成功與否有著關(guān)鍵性的作用。所以,，了解胰酶和雙抗,，我們培養(yǎng)細(xì)胞的道路就已經(jīng)走成功了一步,。
胰酶
胰酶是什么,？
胰酶是一種解離試劑,，本質(zhì)是可以降解蛋白的酶,，生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用來(lái)把貼壁細(xì)胞從貼壁面解離下來(lái)和使細(xì)胞解聚，也可以用于原代細(xì)胞的傳代過(guò)程中分散組織,。
胰酶使用的濃度是多少,？
胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02?TA作為消化液。
為什么收到的胰酶會(huì)有顏色差異,？
商品化胰酶溶液需要用干冰運(yùn)輸,，在運(yùn)輸過(guò)程中，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會(huì)極少部分的氣體交換,，導(dǎo)致溶液PH的漂移,。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的,。由干冰運(yùn)輸過(guò)程中導(dǎo)致的PH值的變化很小,，PH值會(huì)從7.2-8.0變化到了6.8左右，在PH值7.2-8.0的時(shí)候,，溶液呈淡紅色,；PH值6.8左右時(shí)呈淡黃色的。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起,，歸因于使用干冰運(yùn)輸,。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象，在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會(huì)出現(xiàn),。
淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎,？
簡(jiǎn)單一個(gè)字：能
對(duì)于胰酶呈黃色的問(wèn)題,，不同品牌也都對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行了測(cè)試實(shí)驗(yàn)。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離,，請(qǐng)放心使用,。
細(xì)胞消化時(shí)，胰酶不去除對(duì)細(xì)胞的影響
細(xì)胞消化時(shí),，如果消化液中只有胰酶,，不含EDTA，不去除是沒(méi)有問(wèn)題的,。
如果消化液中含有胰酶和EDTA,，去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑,，主要作用在于能螯合Ca,、Mg離子，使細(xì)胞分離,。但EDTA不能被血清中和,，消化后要*清洗去除，否則細(xì)胞易脫壁,。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率,，所以常二者合用。
胰酶的保存
胰酶可在-20℃下保存一年,。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，胰酶的消化能力減弱,。胰酶可分裝凍存,，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長(zhǎng)期保存,。
雙抗
什么是雙抗,？
雙抗就是青鏈霉素混合液，青鏈霉素混合液(100X) ,。是專(zhuān)門(mén)用于細(xì)胞培養(yǎng)的,，可以直接添加到細(xì)胞培養(yǎng)液內(nèi)。
雙抗作用是什么,？
雙抗起的作用：抗生素,，抑制細(xì)菌生長(zhǎng)；避免細(xì)胞污染,。
培養(yǎng)液中需要加入雙抗嗎,？
加不加雙抗不是的，視實(shí)際情況而定,。
如果你實(shí)驗(yàn)室條件足夠好,，如果你操作足夠規(guī)范,，就盡量不要加雙抗了。相反,，如果你實(shí)驗(yàn)條件不夠,，操作也沒(méi)有把握，還是加的好,。的方法是做個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)照,，看有沒(méi)有必要加雙抗。
如何加入雙抗,？
在細(xì)胞培養(yǎng)液中推薦的青霉素的工作濃度為100U/ml,鏈霉素的工作濃度為0.1mg/ml,。
如果加多了話對(duì)細(xì)胞毒性太大，細(xì)胞生長(zhǎng)艱難,。加入雙抗時(shí),，一般先加在培養(yǎng)基里，因?yàn)槿绻侵苯釉趽Q液傳代滴加的話,，那個(gè)雙抗的濃度實(shí)在不好控制,。
誤區(qū)：長(zhǎng)期使用抗生素，以對(duì)抗污染
細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)不應(yīng)常規(guī)使用抗生素
連續(xù)使用抗生素會(huì)促進(jìn)抗生素耐藥性細(xì)胞株的產(chǎn)生,，導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在,，一旦將抗生素從培養(yǎng)基中去除，這種輕度污染zui終將發(fā)展成大規(guī)模污染
連續(xù)使用抗生素會(huì)掩蓋支原體感染及其他隱性污染
有些抗生素會(huì)與細(xì)胞發(fā)生交叉反應(yīng),，干擾您研究的細(xì)胞過(guò)程
雙抗的保存
雙抗通常情況下在-20℃保存一年,。由于該試劑在4℃下長(zhǎng)期存放是不穩(wěn)定的，應(yīng)分裝后在-20℃下避光保存,。青霉素在2-8的℃存放時(shí)間不應(yīng)超過(guò)4天,，鏈霉素相對(duì)穩(wěn)定一點(diǎn)，在2-8℃可以存放30天左右,。切記,，雙抗從凍融后里面的基本成分已開(kāi)始降解。
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