化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
了解了胰酶和雙抗,，還怕養(yǎng)不出好細胞么,？
閱讀：6190 發(fā)布時間：2019-5-7一說到培養(yǎng)細胞,，胰酶和雙抗是培養(yǎng)過程中*的一部分,，對細胞培養(yǎng)是否成功與否有著關(guān)鍵性的作用。所以,，了解胰酶和雙抗,，我們培養(yǎng)細胞的道路就已經(jīng)走成功了一步。
胰酶
胰酶是什么,？
胰酶是一種解離試劑,，本質(zhì)是可以降解蛋白的酶，生物學(xué)實驗中常用來把貼壁細胞從貼壁面解離下來和使細胞解聚,，也可以用于原代細胞的傳代過程中分散組織,。
胰酶使用的濃度是多少？
胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02?TA作為消化液,。
為什么收到的胰酶會有顏色差異,？
商品化胰酶溶液需要用干冰運輸,，在運輸過程中,，胰酶溶液中的二氧化碳與干冰揮發(fā)的二氧化碳可能會極少部分的氣體交換，導(dǎo)致溶液PH的漂移,。有些胰酶溶液里含有酚紅作為PH值指示劑,，因此胰酶PH的變化是肉眼可觀察到的。由干冰運輸過程中導(dǎo)致的PH值的變化很小,，PH值會從7.2-8.0變化到了6.8左右,，在PH值7.2-8.0的時候，溶液呈淡紅色,；PH值6.8左右時呈淡黃色的,。因此胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運輸。這種顏色的變化是行業(yè)普遍現(xiàn)象,，在不同供應(yīng)商的胰酶產(chǎn)品都會出現(xiàn),。
淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎？
簡單一個字：能
對于胰酶呈黃色的問題,，不同品牌也都對此現(xiàn)象進行了測試實驗,。變色的胰酶同樣能很好的用于細胞的解離，請放心使用,。
細胞消化時,，胰酶不去除對細胞的影響
細胞消化時，如果消化液中只有胰酶,，不含EDTA,，不去除是沒有問題的。
如果消化液中含有胰酶和EDTA,，去除,。EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca,、Mg離子,，使細胞分離。但EDTA不能被血清中和,，消化后要*清洗去除,，否則細胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率,，所以常二者合用,。
胰酶的保存
胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長,，胰酶的消化能力減弱,。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20℃冰箱取出,。盡量避免在4℃長期保存,。
雙抗
什么是雙抗？
雙抗就是青鏈霉素混合液,，青鏈霉素混合液(100X) ,。是專門用于細胞培養(yǎng)的，可以直接添加到細胞培養(yǎng)液內(nèi),。
雙抗作用是什么,？
雙抗起的作用：抗生素，抑制細菌生長,；避免細胞污染,。
培養(yǎng)液中需要加入雙抗嗎,？
加不加雙抗不是的，視實際情況而定,。
如果你實驗室條件足夠好,，如果你操作足夠規(guī)范，就盡量不要加雙抗了,。相反,，如果你實驗條件不夠，操作也沒有把握,，還是加的好,。的方法是做個實驗對照，看有沒有必要加雙抗,。
如何加入雙抗,？
在細胞培養(yǎng)液中推薦的青霉素的工作濃度為100U/ml,鏈霉素的工作濃度為0.1mg/ml。
如果加多了話對細胞毒性太大,，細胞生長艱難,。加入雙抗時，一般先加在培養(yǎng)基里,，因為如果是直接在換液傳代滴加的話,，那個雙抗的濃度實在不好控制。
誤區(qū)：長期使用抗生素,，以對抗污染
細胞培養(yǎng)時不應(yīng)常規(guī)使用抗生素
連續(xù)使用抗生素會促進抗生素耐藥性細胞株的產(chǎn)生,，導(dǎo)致輕度污染持續(xù)存在，一旦將抗生素從培養(yǎng)基中去除,，這種輕度污染zui終將發(fā)展成大規(guī)模污染
連續(xù)使用抗生素會掩蓋支原體感染及其他隱性污染
有些抗生素會與細胞發(fā)生交叉反應(yīng),，干擾您研究的細胞過程
雙抗的保存
雙抗通常情況下在-20℃保存一年。由于該試劑在4℃下長期存放是不穩(wěn)定的,，應(yīng)分裝后在-20℃下避光保存,。青霉素在2-8的℃存放時間不應(yīng)超過4天，鏈霉素相對穩(wěn)定一點,，在2-8℃可以存放30天左右,。切記，雙抗從凍融后里面的基本成分已開始降解,。
上海滬鼎專業(yè)供應(yīng)微生物培養(yǎng)基,，進口培養(yǎng)基,，胎牛血清,，對照品，ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒等生化試劑產(chǎn)品多年,，在業(yè)內(nèi)享有良好的聲譽,，請放心選購,。公司供應(yīng)試劑盒產(chǎn)品有ELISA檢測試劑盒，ELISA酶聯(lián)免疫試劑盒,，食品檢測試劑盒,，人ELISA試劑盒，大鼠ELISA試劑盒,，小鼠ELISA試劑盒,，豬ELISA試劑盒，雞ELISA試劑盒等,，更多ELISA試劑盒價格請電聯(lián)我公司業(yè)務(wù)員,，上海滬鼎將竭誠為您服務(wù)！