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中級(jí)會(huì)員·14年您現(xiàn)在的位置： 首頁(yè)> 公司動(dòng)態(tài)> 【瓊脂糖凝膠電泳】 真假GelRed對(duì)比試驗(yàn)
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目前市場(chǎng)上幾種代表性的核酸染料：
GelRed是一款集高靈敏度、低毒性和光穩(wěn)定性于一體的核酸凝膠染料,。由于染料分子不能透過(guò)人體細(xì)胞膜,，保證了實(shí)驗(yàn)環(huán)境的安全與潔凈,。該產(chǎn)品已通過(guò)美國(guó)環(huán)保局安全認(rèn)定,，廢棄物可直接倒入下水道,，不會(huì)造成任何環(huán)境污染,。
EB （溴化乙啶）是早期分子實(shí)驗(yàn)中常用的小分子核酸凝膠染色劑，但染色效果并不靈敏,，背景熒光信號(hào)太強(qiáng),，分辨率不高。zui重要的EB是一種高誘變性致癌的化學(xué)物質(zhì),。
SYBR Green I和 SYBR Gold 也被廠家宣傳為靈敏的凝膠染色試劑,。但 SYBR Green I 尤其是 SYBR Gold 在常用的微堿性電泳緩沖溶液或預(yù)制凝膠中會(huì)快速降解，穩(wěn)定性差導(dǎo)致染色效果極不可靠,。 SYBR safe 雖然被認(rèn)為安全,，但它的染色靈敏度遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)。
Goldview從對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,，該產(chǎn)品就是AO（丫啶橙,，一種致癌產(chǎn)品，且熒光亮度不佳）,。請(qǐng)看Goldview 與 AO 對(duì)比試驗(yàn)結(jié)果,。
下面看一下實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
結(jié)果一：
圖一結(jié)果顯示：采用同樣的樣品及電泳條件（點(diǎn)泳池中跑4塊25 ml的凝膠）：
美國(guó)原裝GelRed實(shí)驗(yàn)效果，原裝GelRed染色背景低,，染料靈敏度高,，分辨率強(qiáng),。
而某假貨GelRed和EB背景亮度相當(dāng),。另外在使用過(guò)程中：發(fā)現(xiàn)biotium的GelRed染料呈鮮艷的紫紅色，加入后極易擴(kuò)散,，不會(huì)掛在燒瓶壁上,，而假貨生物的染料呈暗淡的紅色偏褐，加入時(shí)不易擴(kuò)散,，需搖晃才能擴(kuò)散,，且擴(kuò)散后顏色偏土黃。
就實(shí)驗(yàn)特征而言,，假貨經(jīng)銷(xiāo)商的gelred和EB的添加效果非常相似,，懷疑其中有添加EB或goldview,。
圖1 原裝GelRed、假貨GelRed,、DuRed及EB四種核酸凝膠染料的效果對(duì)比圖,。所使用的樣品均采用小片段質(zhì)粒（濃度100 ng/ul，上樣量均為3 ul）,；marker采用天根生化的DNAmarker 3,；染料使用量均為1 ul染料加入25 ml瓊脂糖凝膠中；條件 1%濃度的瓊脂糖凝膠,，電壓150V,；400A 時(shí)間為20 min。EB采用泡染法染色8 min,。
結(jié)果二：
圖二就推薦濃度問(wèn)題做了對(duì)比試驗(yàn),，結(jié)果表示：按照推薦濃度（1:10000，如2.5 ul加入到25 ml膠中）,，GelRed染料由于染料分子偏大,，會(huì)對(duì)marker的大片段遷移有一定影響，偶爾會(huì)造成拖帶,，微笑條帶等情況,。但是小片段分離效果較好；
另外某假貨經(jīng)銷(xiāo)商的假貨GelRed小條帶幾乎彌散,，消失不見(jiàn)了,。
圖2 原裝GelRed與假貨GelRed染料按照推薦濃度跑膠效果對(duì)比圖。所使用的樣品均采用小片段質(zhì)粒（濃度100 ng/ul,，上樣量均為3 ul）,；marker采用天根生化的DNAmarker 3；染料使用量均為2.5 ul染料加入25 ml瓊脂糖凝膠中,；條件 1%濃度的瓊脂糖凝膠,，電壓150V；400A 時(shí)間為20 min,。
綜合以上結(jié)果,，可以看出：
1. 假貨GelRed背景很亮與EB相似，使用顏色又有點(diǎn)偏向GoldView紅褐色,；懷疑假貨中摻入的是致癌誘變?nèi)玖螮B與GoldView的混合物,；而且小片段容易彌散，消失,。
2. 原裝GelRed的*使用濃度為 2 ul加入到50 ml膠,，1ul加入25 ml膠中（圖一）。說(shuō)明書(shū)中推薦濃度使用染料時(shí),，偶爾會(huì)影響大片段DNA的遷移,。
建議廣大用戶從廠商購(gòu)買(mǎi)安全的原裝產(chǎn)品,，避免上當(dāng)受騙。
