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標(biāo)簽: 生物素 酰化 探針
在標(biāo)準的切口平移實驗體系中,,生物素-11-dNTP取代了dNTP,,DNA酶I 的濃度調(diào)整到可生成長100~500個核苷酸的范圍,其他生物素?;暮塑账嵋部纱嫔锼?11-dNTP,。
實驗方法
- 切口平移法
- 隨即寡核苷酸引物合成法
實驗材料 | DNA |
---|---|
試劑、試劑盒 | DNA聚合酶 dNTP 2-疏基乙醇 生物素 NaCl EDTA SDS 無水乙醇 |
儀器,、耗材 | 注射器 電泳儀 離心機 培養(yǎng)箱 |
實驗步驟 | 1. 混合以下物質(zhì)于100 μl 反應(yīng)體積:
3. 加樣于瓊脂糖凝膠,,同時帶對照分子量標(biāo)準,,在15 V/cm 電壓降下電泳。
4. 消化的DNA大小介于100~500 bp 之間,,接步驟5繼續(xù),,若大小在500~1 000核苷酸之間(或更大)加入第二份DNA酶Ⅰ繼續(xù)溫育。
5. 加入2 μl,,0.5 mol/l pH8.0的EDTA和1 μl 10%SDS,,68℃加熱10 min 終止反應(yīng)和滅活DNA酶Ⅰ。
6. 在1 ml 注射器中準備如Sephadex G-50離心柱,,用2 ml 無水乙醇清洗注射器和硅化的玻璃棉。
9. 用比色法估計生物素酰化反應(yīng)的程度和探針的質(zhì)量或進行化學(xué)發(fā)光檢測,。 |
上海北諾生物科技有限公司 - 主營產(chǎn)品: 免疫學(xué),細胞學(xué),分子生物學(xué),微生物學(xué),即用型試劑,常規(guī)生化試 ...
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