聯(lián)系電話
上海北諾生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員·14年您現(xiàn)在的位置： 首頁(yè)> 公司動(dòng)態(tài)> DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：染色體GTG標(biāo)本制備
- 聯(lián)系人：
- 周經(jīng)理 劉經(jīng)理
- 電話：
- 021-57730393
- 手機(jī)：
- 15800960770
- 傳真：
- 86-021-61496710
- 地址：
- 上海市徐匯區(qū)宜山路520號(hào)中華門大廈18樓D座
- 個(gè)性化：
- www.bnbiotech.com
- 網(wǎng)址：
- www.bnbiotech.com
掃一掃訪問(wèn)手機(jī)商鋪
一,、原理
非顯帶染色體除可根據(jù)形態(tài)分辨部分染色體,，其他多數(shù)染色體難以確認(rèn)，而顯帶技術(shù)則可使染色體縱向長(zhǎng)度上出現(xiàn)不同帶紋,，以辨認(rèn)全部染色體,。GTG即G帶，Trypsin（胰酶）,，Giemsa的簡(jiǎn)寫,。Giemsa染料是噻嗪——曙紅染料，染色體的著色有賴于在原位形成噻嗪--曙紅（2∶1）的沉淀物,。著色首先取決于二個(gè)噻嗪分子同DNA結(jié)合,，在此基礎(chǔ)上再結(jié)合一個(gè)曙紅分子，其次取決于一個(gè)疏水環(huán)境,，以利于染料沉淀而著色,。通過(guò)胰酶的顯帶預(yù)處理可除去陰性G帶區(qū)的疏水蛋白，或使它們的結(jié)構(gòu)變成更疏水狀態(tài),。由此可知,，在G顯帶中抽取的蛋白往往是疏水的，且主要來(lái)自陰性G帶區(qū),。
二,、用品和試劑
0.25%胰酶（0.85%NaCl配制，pH為7.2-7.4）,，余同實(shí)驗(yàn)一,。
三、操作步驟
1. 標(biāo)本老化：
按常規(guī)制備人外周血淋巴細(xì)胞染色體標(biāo)本（未染色）氣干后,，經(jīng)78℃烘箱2-3小時(shí),。 取出置37℃恒溫箱3天后預(yù)處理。
2. 胰酶預(yù)處理：
將染色體標(biāo)本浸入胰酶溶液（已置4℃冰箱穩(wěn)1小時(shí)以上）中40-50秒,，取出立即水洗去多余胰酶,。
3. Giemsa染色：
1∶10 Giemsa染色液染色5-10分鐘,，洗去多余染料，氣干,。
4. 鏡檢：油鏡下可見分散良好的染色體縱軸上呈現(xiàn)深淺不同帶紋,，即為可讀標(biāo)本。
四,、注意事項(xiàng)
1. 常規(guī)制備的染色體標(biāo)本,，要有較多分裂相，分散良好,，染色體長(zhǎng)度適中,。
2. GTG帶的關(guān)鍵在于胰酶處理的時(shí)間。若染色體仍著色較深,，帶紋不明,，則預(yù)處理時(shí)間不足，應(yīng)延長(zhǎng)預(yù)處理時(shí)間,；若染色體變粗并顯出毛糙邊緣,，甚至呈糊狀，則為預(yù)處理過(guò)度,，應(yīng)適當(dāng)縮短處理時(shí)間,。
3. Giemsa染色時(shí)間要適中，時(shí)間短,，著色不夠,，深淺帶反差小,；時(shí)間過(guò)長(zhǎng),，著色深，亦影響帶紋反差,，不易識(shí)別,。
