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實驗原理
免疫細胞化學（immunocytochemistry）是根據(jù)免疫學原理，利用抗體同特定抗原專一結合,，對抗原進行定位測定的技術,。抗原主要為大分子或與大分子相結合的小分子；抗體則是由漿細胞針對特定的抗原分泌的γ球蛋白,。如果將抗體結合上標記物，再與組織中的抗原發(fā)生反應,，即可在光鏡或電鏡下顯示出該抗原存在于組織中的部位,。
常用的標記物有熒光素和酶。熒光素標記的稱為免疫熒光法（immunofluorescent technique）,，常用的螢光素有異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate）,、羅丹明（rhodamine）等。酶標記的稱為酶標免疫法（enzyme-labeled antibody method）,，常用的酶有辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase）,，酶與底物發(fā)生反應后形成不透明的沉積物,，從而顯示出抗原存在的部位。
抗體與抗原的結合方法可分為直接法和間接法兩種,，直接法是將帶有標記的抗體與抗原反應,，顯示出抗原存在的部位。而間接法則是在抗體抗原初級反應的基礎上,，再用帶標記的次級抗體同初級抗體反應,，從而使初級反應得到放大，顯示增強,。
實驗步驟
1. 石蠟切片4-5μm,；
2. 切片脫蠟至水；
3. 3%甲醇雙氧水阻斷室溫10分鐘,；
4. 0.01M(PH 7.2)磷酸鹽緩沖液洗5分鐘3次,；抗原修復，加入0.01M（PH 6.0）檸檬酸緩沖液置微波爐中10檔3分30秒,，之后可進行2檔1分至1分30秒微波維持,。
5. 自然冷卻后洗，加二抗同種動物非免疫血清封閉,，室溫10分鐘,；
6. 免洗，傾出血清,，分別滴加配制好的一抗4℃夜,；
7. 洗5分鐘3次；
8. 滴加生物素標記的第二抗體,，室溫孵育10分鐘,；
9. 洗5分鐘3次；
10. 滴加鏈親和素-過氧化物酶,，室溫10分鐘,；
11. 洗5分鐘3次；
12. 新鮮配制的DAB溶液顯色3-10分鐘,；
13. 自來水洗,，蘇木素淺染細胞核，分化,。自來水沖洗返蘭,，梯度酒精脫水，二甲苯透明,，中性樹膠封固,。
