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實驗試劑
1. 使用前,，將RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。
2. 按下表用無水乙醇稀釋DNA Wash Buffer,，并于室溫保存,。
D6948-00B: 加入8ml無水乙醇
D6948-01B: 加入80ml無水乙醇
D6848-02B: 加入80ml無水乙醇
實驗步驟
1. 取1.5-5ml 菌液10，000 x g室溫離心1min收集菌體沉淀,；
2. 小心去除上清液,，加250ul Solution I/RNase，渦旋或用移液槍上下吹打重懸菌體,。
3. 加250ul SolutionⅡ,，來回顛倒4- 6次輕柔混勻，得到澄清的裂解液,。
4. 加125ul Buffer N3,，顛倒混勻幾次直至出現(xiàn)白色絮狀沉淀，室溫放置2-3min讓其充分反應(yīng),。
5. 12,，000×g 室溫或4℃離心10min得上清，把上清轉(zhuǎn)移到一個新的離心管內(nèi),；
6. 加入與上清等體積的ETR Binding Buffer,，顛倒混勻7-10次，室溫放置5min,。
7. 結(jié)合質(zhì)?！呀Y(jié)合柱插入2ml收集管,，每次轉(zhuǎn)移700ul混合液至結(jié)合柱柱里，8,，000×g離心1min,，棄濾液。
8. 重復(fù)第7步,，直至所有上清都過濾完,，棄濾液。
9. 加入500ul ETR Wash Buffer到結(jié)合柱上,，8,，000×g離心1min，使全部液體濾過柱子,，棄濾液,。
10. 加入500ul Buffer EHB到結(jié)合柱上，8,，000×g離心1min,，使全部液體濾過柱子，棄濾液,；
11. 加入700ul DNA Wash Buffer到結(jié)合柱上,， 8，000×g離心1min使全部液體濾過柱子,，棄濾液,；
注意：濃縮的DNA Wash Buffer在使用之前必須按標簽的提示用無水乙醇稀釋。
12. 加入700ul DNA Wash Buffer到結(jié)合柱上,，8,，000×g離心1min使全部液體濾過柱子，棄濾液,；
13. 把空柱子套回離心管,，zui大轉(zhuǎn)速（不超過13，0 0 0×g）離心2min干燥柱子,；
14. 把結(jié)合柱套在一個新的1.5ml離心管中,，加入30-50ul Endotoxin-Free Elution Buffer，室溫放置2-5min,，zui高轉(zhuǎn)速離心1min洗脫質(zhì)粒DNA,。
