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臍帶血干細胞的準備
試劑和材料:
1.運輸培養(yǎng)基:Eagle基礎培養(yǎng)基(EBM),添加300U/ml青霉素和300μg/ml鏈霉素,,150μg/ml慶大霉素和1μg/ml兩性霉素B,;
2.夾子,;
3.剪刀,;
4.抗凝劑:CPDA-1:122mmol/L(26g/L)枸櫞酸鈉,,0.142mol/L(25.5g/L)葡萄糖,,15.6 mmol/L(3.0g/L)枸櫞酸和18.3 mmol/L(2.2g/L)磷酸二氫鈉,;
5.etadine﹡或70%乙醇;
6.18號注射器針頭,;
7.臍帶收集袋,,175ml,含24.5ml CPDA-1,;
8.50ml注射器,,含200I.U.肝素
實驗方法:
1.出生后,用兩個夾子在近新生兒的末端和近胎盤的末端夾住臍帶以封閉臍帶,;
2.剪下兩個夾子間的臍帶,,一端在接近新生兒處,另一端剪去胎盤,;
3.剪下臍帶后放入運輸培養(yǎng)基中送去實驗室,,整個處理過程在6-12h內(nèi);
4.用Betadine或70%酒精的棉花擦拭針頭插入位點,,位點在臍帶近胎兒末端,;
5.為了收集到zui大量的臍血,臍帶的處理動作要盡可能??;
6.接著用收集袋或50ml注射器的針頭插入步驟2中處理好的臍靜脈插入位點;
7.將收集袋保持在低于插入位點的水平,,以利于臍血在重力作用下流入容器中,,或者用50ml注射器緩慢地將臍血從臍靜脈內(nèi)抽出。盡可能多地收集臍血,,一般能收集到60-150ml,;
8.如果出現(xiàn)靜脈滑脫,可沿臍帶稍上處用Betadine或70%酒精消毒后重新插入針頭,;
9.血流停止后,,打開針頭安全帽,,將它推入鎖定位置,。注意:臍血應該保存于室溫,,不要冷藏;
10.如果使用袋裝,,用附帶的卡環(huán)夾住管子,,盡可能接近血袋處打兩個安全結以防止泄露,然后剪去針頭,,將針頭放入尖頭容器中丟棄,;
11.輕輕轉(zhuǎn)動血袋或注射器幾次,使臍血與抗凝劑充分混合,;