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從臍靜脈分離干細(xì)胞
試劑和材料：
1.培養(yǎng)基：*LG-DMEM：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM,，添加10%熱滅活胎牛血清,，100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素；
2.A,；
3.胰蛋白酶,，0.05%,，含EDTA；
4.膠原酶A,，0.1%用A配制,；
5.培養(yǎng)瓶；
6.導(dǎo)管,；
實(shí)驗(yàn)方法：
1.在正常分娩后6-12h內(nèi)收集和處理臍帶,；
2.在臍靜脈內(nèi)插入導(dǎo)管，用A*地洗2次,；
3.夾住遠(yuǎn)端臍帶,；
4.用0.1%膠原酶溶液充滿靜脈；
5.夾住近端臍帶,；
6.將臍帶在37℃孵育20min,；
7.輕輕按摩臍帶，收集含有內(nèi)皮和內(nèi)皮下層細(xì)胞的懸浮液,，600g離心10min,；
8.用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞；
9.計(jì)數(shù)后,，按1&time103個(gè)細(xì)胞/cm2的密度將細(xì)胞接種到75cm2的培養(yǎng)瓶中,；
10.3天后更換培養(yǎng)基，除去未貼壁細(xì)胞,，保留貼壁的細(xì)胞繼續(xù)生長,，每3天更換一次新鮮培養(yǎng)基，至大約2周后可見成纖維樣細(xì)胞生長,；
11.在這種情況下,，用0.25%胰蛋白酶/EDTA收集細(xì)胞，傳代到新培養(yǎng)瓶中繼續(xù)擴(kuò)增,；
