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1,、 選取7~8周齡雌性小鼠，陰道口封閉,，作為供體,，下午3:00左右，每只小鼠腹腔注射PMSG（10 IU）,。
2,、 47~48小時后，每只小鼠腹腔注射HCG（0.8 IU）,，并與正常公鼠合籠,；另取數(shù)只適齡母鼠（2月齡以上）作為受體,，陰道口潮紅，與結扎公鼠合籠,。
3,、第二天上午9:00前觀察供體、受體,，有精栓者拿出備用,。受體籠拿出作好隔離措施,。
4,、10:30左右，斷頸處死供體,，手術取出整個輸卵管,，放入透明質(zhì)酸酶~0.3mg/M2液中。顯微鏡下,，用鑷子撕開輸卵管壺腹部,，受精卵隨同顆粒細胞即一同流出。
5,、仔細觀察放在透明質(zhì)酸酶M2液中的受精卵,，當受精卵周圍的顆粒細胞脫離時，將受精卵吸出,，放入M2液中洗滌,，zui后放在M16液中放入5% CO2，37C0培養(yǎng)箱培養(yǎng),。
6,、在顯微鏡下觀察，挑選細胞飽滿,，透明帶清晰,，雄原核清晰可見的受精卵待用。
7,、安裝持卵針和注射針,，使其末端平行于載物臺，在凹玻片的中央滴入一滴M2液,，覆蓋石蠟油,，移入待注射的受精卵。DNA在注射針中的氣泡應在先前全部彈走,。
8,、在高倍鏡下，將注射針輕觸持卵管,，使DNA緩慢流出并控制其流量,；反復吹吸受精卵,，使其處于*位置，將注射針刺入受精卵的雄原核,，直至看到原核膨大即退出,。將注射過的和未注射過的受精卵上下分開放置，不致于混攪,，注射完畢后,，放入5% CO2，37C0培養(yǎng)箱培養(yǎng),。
9,、將受體麻醉，注射計量為1%戊巴比妥鈉0.01ml/g,，腹腔注射,。手術取出卵巢連接輸卵管，用脂肪鑷固定,，在顯微鏡下找到輸卵管開口,。吸取注射后經(jīng)培養(yǎng)成活的受精卵，吸取方法是先吸一段較長的M2,，吸一個氣泡,，然后吸取受精卵，盡量緊密排列,，再吸一段液體,，吸一個氣泡，再吸一段液體,，共四段液體三個氣泡,。除較長的那段液體，其余的液體大致1cm左右,，氣泡0.2cm左右,。將移植管口插入輸卵管口，輕輕將移植管內(nèi)的液體吹入,，看到輸卵管壺腹部膨大并清晰地看到三個氣泡,，即移植成功。將卵巢連同輸卵管放回腹腔,，縫合肌肉和皮膚,。
10、受體每隔一個星期稱體重一次,，當?shù)诙伪?次稱重增加時,，即可初步判斷懷孕。手術后19~21天仔鼠分娩,，待仔鼠3周后,，剪耳,、編號，剪尾,，交分子組檢測,。
(一般選取4-5周齡的雌鼠作為供體，此時的小鼠卵數(shù)較多,，狀態(tài)較好,。用pms誘導卵細胞成熟，用hcg超排,。)
