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(一)實驗?zāi)康?/strong>
了解細(xì)菌生長曲線的持點及測定原理,，學(xué)會用比濁法測定細(xì)菌的生長曲線,。
(二)實驗原理
將一定數(shù)量的細(xì)菌,，接種于適宜的液體培養(yǎng)基中,，在適溫下培養(yǎng),，定時取樣測數(shù),，以菌數(shù)的對數(shù)為縱坐標(biāo)，生長時間為橫坐標(biāo),，作出的曲線稱為生長曲線,。該曲線表明細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下群體生長與繁殖的規(guī)律。一般分為延緩期,、對數(shù)期,、穩(wěn)定期及衰亡期四個時期，各時期的長短同菌種本身特征,、培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件不同而異,。
比濁法是根據(jù)細(xì)菌懸液細(xì)胞數(shù)與混濁度成正比，與透光度成反比關(guān)系,，利用光電比色計測定細(xì)胞懸液的光密度(即OD值),，用于表示該菌在本實驗條件下的相對生長量,。
實驗設(shè)正常生長、加酸抑制和加富培養(yǎng)等三種處理,，以了解細(xì)菌在不同生長條件下的生長情況,。
（三）實驗器材
(1)活材料：大腸桿菌(E.coli)。
(2)培養(yǎng)基和試劑：牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基14支(每支10mL),，濃縮5 倍的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1支,。無菌酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。
(3)器材：1mL無菌吸管,、搖床,、冰箱、光電比色計,、標(biāo)簽等,。
（四）實驗方法
方法(1)
1)接種：取13支裝有牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的試管，貼上標(biāo)簽(注明菌名,、培養(yǎng)處理,、培養(yǎng)時間、組號),。按無菌操作法用吸管向每管準(zhǔn)確加入0.2mL的大腸桿菌培養(yǎng)液,，接種后，輕輕搖蕩,，使菌體混勻,。另一支不接種的培養(yǎng)管注明CK(對照)。
2)培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)管置于搖床上,，在37℃下振蕩培養(yǎng),。其中9支培養(yǎng)管分別于培養(yǎng)的0、1．5,、3,、4、6,、8,、10、12和14h后取山,，放冰箱中貯存,，待測定。加酸處理,。取出經(jīng)4h培養(yǎng)的另二支培養(yǎng)管,，按無菌操作法加入lmL無菌酸溶液，搖勻后放回?fù)u床上,，繼續(xù)振蕩培養(yǎng),，于培養(yǎng)8h和14h后取出放冰箱中貯存,，待測定。加富營養(yǎng)物處理,。余下的二支培養(yǎng)管于培養(yǎng)6h后取出,，按無菌操作法加入濃縮5倍的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液1mL，搖勻后,，繼續(xù)進(jìn)行振蕩培養(yǎng),，于培養(yǎng)8h和14h后取出，放入冰箱中貯存,，待測定,。
3)比濁：將培養(yǎng)不同時間、形成不同細(xì)胞濃度的細(xì)菌培養(yǎng)液進(jìn)行適當(dāng)稀釋,，使光密度值在0.0-0.4范圍內(nèi),，以未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基調(diào)零點，在光電比色計上,，選用400-440nm波長的濾光片進(jìn)行比濁,，從zui稀濃度的菌懸液開始，依次測定,。
方法(2)
將大腸桿菌接入裝有牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的小試管中(試管要能插入放比色杯的比色槽內(nèi)),。37℃下振蕩培養(yǎng)，分別在0,、1.5 ,、3,、4,、6、8,、10,、12和14h取出，以未接種培養(yǎng)液調(diào)零點,，在光電比色計上比色,。比色時應(yīng)自制一個暗盒將培養(yǎng)管和比色槽罩住，以形成一個暗室,。
（五）繪制曲線
以細(xì)菌懸液的光密度值(OD)為縱坐標(biāo),，培養(yǎng)時間為橫坐標(biāo)，給出大腸桿菌在正常生長,、加酸處理和加富培養(yǎng)三種條件下的生長曲線,。
如果我們將上述培養(yǎng)0，1.5,，3,，4,，6，8,，10,，12，14h的細(xì)菌懸液用稀釋平板測數(shù)法進(jìn)行測數(shù),，測出不同時間的含菌數(shù),，以菌懸液比濁的光密度值為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌的數(shù)量為縱坐標(biāo),，繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線,，這樣在測得了任一培養(yǎng)時間的菌懸液光密度值后，就可以在此標(biāo)淮曲線上查出含菌數(shù),。這種方法已在工業(yè)上廣泛采用,，它可以節(jié)省許多稀釋平板測數(shù)的時間， 直接用比濁法測得的光密度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線以了解各個培養(yǎng)時期的菌數(shù)消長情況,。
