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(一)實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>

了解細(xì)菌生長(zhǎng)曲線的持點(diǎn)及測(cè)定原理，學(xué)會(huì)用比濁法測(cè)定細(xì)菌的生長(zhǎng)曲線,。

(二)實(shí)驗(yàn)原理

將一定數(shù)量的細(xì)菌,，接種于適宜的液體培養(yǎng)基中，在適溫下培養(yǎng),，定時(shí)取樣測(cè)數(shù),，以菌數(shù)的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，生長(zhǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo),，作出的曲線稱為生長(zhǎng)曲線,。該曲線表明細(xì)菌在一定的環(huán)境條件下群體生長(zhǎng)與繁殖的規(guī)律。一般分為延緩期,、對(duì)數(shù)期,、穩(wěn)定期及衰亡期四個(gè)時(shí)期，各時(shí)期的長(zhǎng)短同菌種本身特征,、培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件不同而異,。

比濁法是根據(jù)細(xì)菌懸液細(xì)胞數(shù)與混濁度成正比，與透光度成反比關(guān)系,，利用光電比色計(jì)測(cè)定細(xì)胞懸液的光密度(即OD值),，用于表示該菌在本實(shí)驗(yàn)條件下的相對(duì)生長(zhǎng)量,。

實(shí)驗(yàn)設(shè)正常生長(zhǎng)、加酸抑制和加富培養(yǎng)等三種處理,，以了解細(xì)菌在不同生長(zhǎng)條件下的生長(zhǎng)情況,。

（三）實(shí)驗(yàn)器材

 (1)活材料：大腸桿菌(E.coli)。

(2)培養(yǎng)基和試劑：牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基14支(每支10mL),，濃縮5 倍的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1支,。無(wú)菌酸溶液(甲酸：乙酸：乳酸=3：1：1)。

 (3)器材：1mL無(wú)菌吸管,、搖床,、冰箱、光電比色計(jì),、標(biāo)簽等,。

（四）實(shí)驗(yàn)方法

方法(1)

1)接種：取13支裝有牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的試管，貼上標(biāo)簽(注明菌名,、培養(yǎng)處理,、培養(yǎng)時(shí)間、組號(hào)),。按無(wú)菌操作法用吸管向每管準(zhǔn)確加入0.2mL的大腸桿菌培養(yǎng)液,，接種后，輕輕搖蕩,，使菌體混勻,。另一支不接種的培養(yǎng)管注明CK(對(duì)照)。

2)培養(yǎng)：將接種后的培養(yǎng)管置于搖床上,，在37℃下振蕩培養(yǎng),。其中9支培養(yǎng)管分別于培養(yǎng)的0、1．5,、3,、4、6,、8,、10、12和14h后取山,，放冰箱中貯存,，待測(cè)定。加酸處理,。取出經(jīng)4h培養(yǎng)的另二支培養(yǎng)管,，按無(wú)菌操作法加入lmL無(wú)菌酸溶液，搖勻后放回?fù)u床上,，繼續(xù)振蕩培養(yǎng),，于培養(yǎng)8h和14h后取出放冰箱中貯存,，待測(cè)定。加富營(yíng)養(yǎng)物處理,。余下的二支培養(yǎng)管于培養(yǎng)6h后取出,，按無(wú)菌操作法加入濃縮5倍的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液1mL，搖勻后,，繼續(xù)進(jìn)行振蕩培養(yǎng),，于培養(yǎng)8h和14h后取出，放入冰箱中貯存,，待測(cè)定,。

3)比濁：將培養(yǎng)不同時(shí)間、形成不同細(xì)胞濃度的細(xì)菌培養(yǎng)液進(jìn)行適當(dāng)稀釋,，使光密度值在0.0-0.4范圍內(nèi),，以未接種的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基調(diào)零點(diǎn)，在光電比色計(jì)上,，選用400-440nm波長(zhǎng)的濾光片進(jìn)行比濁,，從zui稀濃度的菌懸液開始,，依次測(cè)定,。

方法(2)

將大腸桿菌接入裝有牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液的小試管中(試管要能插入放比色杯的比色槽內(nèi))。37℃下振蕩培養(yǎng),，分別在0,、1.5 、3,、4,、6、8,、10,、12和14h取出，以未接種培養(yǎng)液調(diào)零點(diǎn),，在光電比色計(jì)上比色,。比色時(shí)應(yīng)自制一個(gè)暗盒將培養(yǎng)管和比色槽罩住，以形成一個(gè)暗室,。

（五）繪制曲線

以細(xì)菌懸液的光密度值(OD)為縱坐標(biāo),，培養(yǎng)時(shí)間為橫坐標(biāo)，給出大腸桿菌在正常生長(zhǎng),、加酸處理和加富培養(yǎng)三種條件下的生長(zhǎng)曲線,。

如果我們將上述培養(yǎng)0，1.5,，3,，4,，6，8,，10,，12，14h的細(xì)菌懸液用稀釋平板測(cè)數(shù)法進(jìn)行測(cè)數(shù),，測(cè)出不同時(shí)間的含菌數(shù),，以菌懸液比濁的光密度值為橫坐標(biāo)，以細(xì)菌的數(shù)量為縱坐標(biāo),，繪制一標(biāo)準(zhǔn)曲線,，這樣在測(cè)得了任一培養(yǎng)時(shí)間的菌懸液光密度值后，就可以在此標(biāo)淮曲線上查出含菌數(shù),。這種方法已在工業(yè)上廣泛采用,，它可以節(jié)省許多稀釋平板測(cè)數(shù)的時(shí)間，  直接用比濁法測(cè)得的光密度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線以了解各個(gè)培養(yǎng)時(shí)期的菌數(shù)消長(zhǎng)情況,。