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免疫學(xué)技術(shù)專題:中性粒細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定

2014-6-18  閱讀(1467)

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中性粒細(xì)胞(polymorphonuclear leukocyte,,PMN)的功能包括粘附,、移動(dòng)、吞噬殺菌等,,是機(jī)體天然免疫力的重要組成部分,。

試劑及材料

1. 白色葡萄球菌

2. 肉湯培養(yǎng)基

3. 鹼性美藍(lán)液

操作方法

1. 菌液的制備  將白色葡萄球菌接種于中,放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)12h左右,;置水浴中加熱100℃ 10min殺死細(xì)菌,,用無(wú)菌生理鹽水稀釋成6×108 細(xì)菌/ml備用;

2. 用血紅蛋白吸管吸取受試者耳垂或指血40μl,,立即加入盛有20μl肝素(濃度為20U/ml)的潔凈凹玻片的凹孔內(nèi),,輕輕攪動(dòng)混勻, 再加上述葡萄球菌菌液20μl充分混勻,。然后置入鋪有濕紗布的有蓋容器內(nèi)(此容器先放37℃溫箱中預(yù)溫),,在37℃溫箱中作用30min,其間每隔10min搖勻一次,;

3. 作用完畢,,取1小滴混合液置于潔凈無(wú)油污的載玻片一端,推成薄片,。待干后,,用甲醇固定4~5min,鹼性美藍(lán)液染2~3min,,置油鏡下觀察,。隨機(jī)計(jì)數(shù)100個(gè)中性粒細(xì)胞,分別記錄發(fā)生吞噬和未吞噬的白細(xì)胞數(shù),,對(duì)有吞噬作用的白細(xì)胞,,應(yīng)同時(shí)記錄所吞噬的細(xì)菌數(shù);

結(jié)果分析

吞噬細(xì)胞%=即100個(gè)中性粒細(xì)胞中吞噬有細(xì)菌的細(xì)胞數(shù),;

吞噬指數(shù)=將100個(gè)中性粒細(xì)胞所吞噬的細(xì)菌總數(shù)除以100,,得到每個(gè)白細(xì)胞吞噬細(xì)菌的平均數(shù),即為吞噬指數(shù),。

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