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1,、石蠟切片置于67℃烘箱中,,烘片2小時(shí),,脫蠟至水,,用pH7.4的PBS沖洗三次,每次3分鐘(3×3’),。
2,、取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液,加入微波盒中,,微波加熱至沸騰,,將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,,中檔微波處理10分鐘,,取出微波盒流水自然泠卻,從緩沖液中取出玻片,先用蒸餾水沖洗兩次,,之后用PBS沖洗2×3’,。(注:不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的,視具體情況而定)
3,、每張切片加1滴3%H2O2,,室溫下孵育10分鐘,以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶的活性,。PBS沖洗3×3’,。
4、除去PBS液,,每張切片加1滴相應(yīng)的*抗體(相應(yīng)稀釋倍數(shù)),,室溫下孵育2小時(shí)。
5,、PBS沖洗3×5’,。除去PBS液,每張切片加1滴聚合物增強(qiáng)劑,,室溫下孵育20分鐘,。PBS沖洗3×3’。
6,、除去PBS液,,每張切片加1滴酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物,室溫下孵育30分鐘,。PBS沖洗3×5’,。
7、除去PBS液,,每張切片加1滴新鮮配制的DAB液(二氨基聯(lián)苯胺),,顯微鏡下觀察5分鐘。
8,、蘇木素復(fù)染,,0.1%HCl分化,自來水沖洗,,藍(lán)化,,切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥,二甲苯透明,,中性樹膠封固,,晾干后觀察。