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一,、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/strong>
掌握測定尿素酶活性的各種方法的基本原理及方法步驟,。
二,、實(shí)驗(yàn)原理
將粉碎的大豆制品與中性尿素緩沖溶液混合,，在30℃保持30min后，尿素酶催化尿素水解產(chǎn)生氨的反應(yīng),。用過量的鹽酸溶液中和所產(chǎn)生的氨,，再用氫氧化標(biāo)準(zhǔn)溶液回滴。
三,、實(shí)驗(yàn)設(shè)備
1,、樣品篩：孔徑200μm；
2,、酸度計(jì)：精度0.02pH,，附有磁力攪拌器和滴定裝置；
3,、恒溫水?。嚎煽販?0±0.5℃；
4,、試管：直徑18mm,，長1 50mm，有磨口塞子,；
5,、精密計(jì)時(shí)器；
6,、粉碎機(jī)：粉碎時(shí)應(yīng)不生強(qiáng)熱（如球磨機(jī)
7,、分析天平．感量0.1mg；
8,、移液管,；10mL,。
四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
1,、稱取約0.2g已粉碎的試樣,，稱準(zhǔn)至0.1mg，轉(zhuǎn)入試管中,，（如活性很高的樣品,，可只稱0.05g試樣），移入10ml尿素緩沖溶液,，立即蓋好試管并劇烈搖動(dòng),，馬上置于30±0.5℃恒溫水浴中，準(zhǔn)確計(jì)時(shí)保持30min,。即刻移人10m1鹽酸溶液,，迅速冷卻到20℃,。
2,、將試管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)入燒杯，用5ml水沖洗試管兩次,，立即用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定到pH4.70 ,。
3、另取試管作空白試驗(yàn),，移人10ml尿素緩沖液,，10ml鹽酸溶液。稱取與上述試樣量相當(dāng)?shù)脑嚇?，也稱準(zhǔn)至0.1mg,，迅速加入此試管中。立即蓋好試管并劇烈搖動(dòng),，將試管置于30±0.5℃的恒溫水浴,，同樣準(zhǔn)確保持20min，冷卻至20℃,，將試管內(nèi)容物全部轉(zhuǎn)入燒杯,，用5mL水沖洗試管兩次，并用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH 4.70,。
4,、以每分鐘每克大豆制品釋放氨的mg量來表示尿素酶的活性（UA），可按下式計(jì)算：
若試樣經(jīng)粉碎前的預(yù)干燥處理時(shí),，則其計(jì)算如下：
由一個(gè)分析人員用相同方法,，同時(shí)或連續(xù)兩次測定結(jié)果之間的相差，應(yīng)不超過平均值的10％,，以其算術(shù)平均值報(bào)告結(jié)果,。
