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基本原理
TNF的生物學(xué)活性之一是能直接殺傷腫瘤細胞,。TNF與相應(yīng)受體結(jié)合后向細胞內(nèi)移，被靶細胞溶酶體攝取導(dǎo)致溶酶體穩(wěn)定性降低,，各種酶外泄,，引起細胞溶解,。腫瘤細胞株對TNF-α的敏感性有很大的差異，用放線菌素D,、絲裂酶素C,、放線菌酮等處理腫瘤細胞,，可明顯增強TNF-α殺傷腫瘤細胞活性。
材料和試劑
1,，*培養(yǎng)基（1）10%FCS-DMEM培養(yǎng)液（V/V）,。
2，*培養(yǎng)基（2）3%FCS-DMEM培養(yǎng)液（V/V）0.5-1μg/ml放線菌素-D,。
3，0.05%結(jié)晶紫溶液：
取50mg結(jié)晶紫,，用20ml無水乙醇溶解后，加水定容至100ml,，室溫保存。
4,，脫色液：
H2O 50mg
無水乙醇 50ml
乙酸 0.1ml
混勻即可,。
5，TNF標(biāo)準(zhǔn)品：由中國藥品生物制品檢定所提供,。
實驗操作
1，此實驗在無菌環(huán)境下進行,，實驗前超凈工作臺應(yīng)用紫外燈照射30分鐘以上,。
2，用*培養(yǎng)基（1）將生長狀態(tài)良好的小鼠L929細胞調(diào)至1×105/ml的細胞懸液,，100μg/孔加入96孔細胞培養(yǎng)板,，5%CO2，37℃培養(yǎng)過,。
3，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：用*培養(yǎng)基（2）將標(biāo)準(zhǔn)品進行10倍稀釋至100IU/ml為起始濃度,，再做4倍稀釋上板,。
4，待檢樣品稀釋：用*培養(yǎng)基（2）將待檢樣品進行10倍稀釋至一定范圍,，再做4倍稀釋準(zhǔn)備上板。
5,，棄96孔細胞培養(yǎng)板上清,，將標(biāo)準(zhǔn)品及待檢樣品按100μl/孔加入96孔細胞培養(yǎng)板，同時設(shè)對照組和空白組,，5%CO2，37℃培養(yǎng)16小時,。
6,，鏡檢后,，棄上清，每孔加30μl 0.05%結(jié)晶紫染色3~5分鐘,，用流水小心沖去結(jié)晶紫,，甩干培養(yǎng)孔中的殘余水份，加入脫色液100μl/孔,，用酶標(biāo)儀測定570nm的光密度值。
結(jié)果計算
1,，在座標(biāo)紙上以O(shè)D570比色值（雙孔比色值的平均值）對稀釋倍數(shù)作圖,，以標(biāo)準(zhǔn)品的zui紙、zui高平均值作平等于X軸的直線,，以各相應(yīng)樣品曲線與該直線的交點，在X軸讀出半效量的稀釋度,。
2,，計算公式：
TNF活性（IU/ml）=標(biāo)準(zhǔn)品效價×樣品預(yù)稀釋倍數(shù)/標(biāo)準(zhǔn)品預(yù)稀釋倍數(shù)×標(biāo)準(zhǔn)品半效量稀釋度/樣品相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)品半效稀釋度。
