聯(lián)系電話
上海北諾生物科技有限公司
中級會員·14年
- 聯(lián)系人：
- 周經(jīng)理 劉經(jīng)理
- 電話：
- 021-57730393
- 手機：
- 15800960770
- 傳真：
- 86-021-61496710
- 地址：
- 上海市徐匯區(qū)宜山路520號中華門大廈18樓D座
- 個性化：
- www.bnbiotech.com
- 網(wǎng)址：
- www.bnbiotech.com
掃一掃訪問手機商鋪
[實驗原理]
根據(jù)決定某等位基因的堿基性質(zhì)，設計3′端*個堿基分別與各等位基因的特異性堿基相匹配的序列特異性引物,，在PCR反應過程中,，只有引物3′端*個堿基與決定特定等位基因的堿基互補時才能實現(xiàn)DNA 片段的*復制，根據(jù)PCR 產(chǎn)物的有無進行等位基因的分型,。
[實驗器材]
PCR 擴增儀,、電泳儀、電泳槽,。
[實驗試劑]
引物1：5′-GCATCAAGTACCACTGGT-3′,；引物2：5′-GCATTAAGTACCACTGAG-3′；共通引物：5′-GAGAAGTTGAGAAAGGGGT-3′,。模板DNA,、Taq 聚合酶,、丙烯酰胺、電極緩沖液,、上樣緩沖液等
[實驗方法]
1.PCR擴增PCR反應體系為20μl（2個體系,，分別為引物1和引物2），含模板2μl（約50ng）,，引物各1.5μl,dNTP1.6μl（0.4mM）,，10×Buffer緩沖液2μl，Taq酶1.0U,，加雙蒸水至20.0μl,；PCR反應條件為94℃4min,94℃1.5min/52℃2.0min/72℃2.0min，30個循環(huán),。
2.PCR 擴增產(chǎn)物的檢測 取PCR擴增產(chǎn)物2μl,，6%聚丙烯酰胺凝膠電泳（T=6%，C=3.3%,，凝膠規(guī)格為82mm×64mm×0.75mm）,。電極緩沖液為1×TBE。將加有1/5體積上樣緩沖液的酶切產(chǎn)物電泳,，220 v 電壓，電泳2－3h,。銀染顯色
[結果判定]
根據(jù)電泳譜帶的有無判定等位基因型別,，僅有1 個體系檢測到譜帶者為相應特異性引物對應型（M 或N），2 個體系均檢測到譜帶者為MN 型,。
[實驗討論]
1.注意事項 ①如引物結合序列存在堿基變異可能無擴增產(chǎn)物,，導致錯誤判型；②在對照樣品分型準確的基礎上才能判定結果,。
