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重組細胞因子溶解小帖士

2013-4-15　　閱讀(1792)

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1．離心（Centrifuge）：高速離心 （10, 000 rpm） 20-30 秒,，或低速離心 （2, 000 rpm） 5 分鐘,。

2．溶解（Reconstitution）：用去離子水或其它緩沖液（根據(jù)說明書要求進行選擇）溶解至說明書要求的濃度 （一般為 0.1-1.0 mg/ml）,。溶解時不可振蕩,，避免因化學鍵的斷裂造成蛋白失活,，可加入適當?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時間,，待細胞因子*溶解后使用,。溶劑的選擇：
1）要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,，務必不可用鹽溶液，避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出,；
2） 要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,，請依照說明書上的濃度，同樣也是為了避免過高的鹽濃度,。

3．分裝和貯存（Aliquot and Storage）：蛋白溶解后可根據(jù)自己的實驗需要進一步稀釋成工作液,，稀釋可用RPMI 1640、DMEM 或PBS 等溶液,。工作液在4℃可保存1 周,，如需長期保存，在稀釋液中加入10%的FCS（小?；蛱ヅＱ澹┗?.1 %的BSA（牛血清白蛋白）或5% HAS（人血清白蛋白）來穩(wěn)定蛋白,，然后需分裝凍存于-20℃ （注意：不可凍存于-50℃以下）。分裝時每管中工作液的體積是一次實驗的用量,，以實現(xiàn)每次實驗用完一支工作液,，避免反復凍融引起蛋白活性的降低。

細胞因子量極微,，所以嚴謹?shù)牟僮魇潜匦璧?，任何不適當?shù)娜芙舛紩斐蓪嶒灥氖。斐纱罅康睦速M,。請謹慎操作,！

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