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PeproTech重組細(xì)胞因子常見問題解答

2013-4-15　　閱讀(1625)

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PeproTech公司的重組細(xì)胞因子產(chǎn)品經(jīng)過了十分嚴(yán)格的生產(chǎn)、純化及質(zhì)檢過程,，保證其在投放市場之前,，達(dá)到如下要求：
1. 真實性：重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過N末端氨基酸序列分析；必要時應(yīng)用SDS-PAGE, RP-HPLC和質(zhì)譜（MS）檢測其真實性,。
2. 純度：應(yīng)用SDS-PAGE和RP-HPLC方法分析產(chǎn)品純度,。
3. 生物活性：進(jìn)行相應(yīng)的體外（in vitro）或體內(nèi)（in vivo）活性檢測。
4. 蛋白含量：通過紫外光譜分析,，SDS-PAGE電泳檢測,；必要時應(yīng)用HPLC定量標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。
5. 內(nèi)毒素：kinetic LAL法檢測內(nèi)毒素。
6. 微生物：重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過濾除菌處理,。

　　產(chǎn)品隨附的說明書上載有產(chǎn)品的各項相關(guān)信息,。請仔細(xì)閱讀這些信息，了解其配制和貯存提示,。如果在閱讀說明書后仍需更多信息,，請查看以下常見問題解答，或致電我們的技術(shù)服務(wù)部門,。

重組細(xì)胞因子的凍干狀態(tài)
與市場上已有的其他蛋白產(chǎn)品不同,，PeproTech細(xì)胞因子不含carrier protein或其他添加物（如BSA、HAS,、蔗糖等）,，而是以低鹽的形式做凍干處理，因此微量的細(xì)胞因子在凍干過程中會沉積于管內(nèi),，形成很薄或不可見的蛋白層,。PeproTech的質(zhì)控過程確保每管裝有非常準(zhǔn)確量的蛋白產(chǎn)品。所以我們建議在收到試劑后,，務(wù)必于開蓋前先離心20-30秒,，使可能附于管蓋或管壁的蛋白成分聚集于管低（此時能否見到白色沉淀均屬正常現(xiàn)象）,。

重組細(xì)胞因子活性單位（units）的換算
各公司在開發(fā)出重組細(xì)胞因子并檢測其活性后,，通常會以ED50（半數(shù)有效濃度）或units（活性單位）來標(biāo)識其細(xì)胞因子的生物活性。因此1mg細(xì)胞因子中所含的活性單位（units）可以理解為將1mg/ml細(xì)胞因子原液稀釋成ED50的稀釋倍數(shù),，以下是二者的換算公式：

 

重組細(xì)胞因子的穩(wěn)定性
除非產(chǎn)品說明書上另有特別說明,，否則所有PeproTech蛋白產(chǎn)品都為凍干粉形式，在室溫下也能保持很好的穩(wěn)定性,。但是,，我們推薦凍干產(chǎn)品保存于-20℃。大多數(shù)凍干產(chǎn)品經(jīng)溶解和稀釋后,，可短時間保存于4℃,；若要進(jìn)行較長時間保存,，我們建議稀釋到工作液濃度并加入一定的carrier protein（如0.1% BSA）,，然后分裝保存于-20℃。請注意每一次凍融過程都會造成蛋白的部分變性,，應(yīng)避免反復(fù)凍融,。

重組細(xì)胞因子的交叉活性
除了少數(shù)例外，大多數(shù)人類細(xì)胞因子對小鼠細(xì)胞都有活性,。許多小鼠細(xì)胞因子對人類細(xì)胞也有活力表現(xiàn),，但是與相應(yīng)的人類細(xì)胞因子相比比活力較低。一些人類的細(xì)胞因子如IL-7在小鼠細(xì)胞中甚至表現(xiàn)出比相應(yīng)的小鼠細(xì)胞因子更高的比活力。而干擾素,、GM-CSF,、IL-3 和IL-4 是物種特異性的，對于非人類細(xì)胞幾乎沒有活性,。相反,，成纖維細(xì)胞生長因子 （FGFs） 和神經(jīng)營養(yǎng)因子 （neurotrophins） 是高度保守的，在其它的動物物種細(xì)胞中也能表現(xiàn)很好的活性,。

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