CY3標(biāo)記

CY3標(biāo)記反應(yīng)原理：
Reactive CY3專一的與伯胺反應(yīng)（N-末端及賴氨酸殘基側(cè)鏈）形成穩(wěn)定的酰胺鍵

操作過(guò)程：
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：

1.   仔細(xì)閱讀使用說(shuō)明書。

2.   計(jì)算待使用Reactive CY3的量,。

3.   提前20 min從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫（注：不需要用到的Reactive CY3繼續(xù)放置冰箱中）,。

4.   溶解Reactive CY3：加入20 μL DMF至Reactive CY3瓶中,，靜置10 min,，待其充分溶解，此時(shí)CY3的濃度為10 mM,。

 
操作步驟：（本操作步驟按照1 mg的量進(jìn)行標(biāo)記）

1.   取1 mg待標(biāo)記抗體于Filtration tube中,，并加入相應(yīng)體積的 Labeling Buffer至總體積為0.5 mL，12,000× g離心10 min,。（注：①Filtration tube的最大體積為0.5 mL。②待標(biāo)記抗體濃度低時(shí),，可先超濾離心一次,。）

2.   加入13.3 μL Reactive CY3 和適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中，使抗體的終濃度為2 mg/mL,，并輕輕吹打混勻,。放入37℃恒溫箱中避光溫育60 min。

3.   12,000 × g離心10 min,。

4.   加入適量Labeling Buffer至上述Filtration tube中,，使終體積為0.5 mL，并輕輕吹打混勻,，12,000×g離心10 min,。并重復(fù)操作一次。

5.   加0.2 mL Labeling Buffer至Filtration tube中,，輕輕吹打,。將濾芯倒轉(zhuǎn)放置于另一個(gè)離心管中，6,000×g離心10 min,。

6.   收集離心管中的溶液,，即為CY3標(biāo)記的抗體,。

 
注意事項(xiàng)：

1.   本試劑盒也可標(biāo)記其它含有氨基（NH2-）的抗原,、HRP、多肽,，具體標(biāo)記比例根據(jù)待標(biāo)記物中氨基的數(shù)量確定,。

2.   DMF要密封干燥保存，使用完立即用封口膜封緊,。

3.   操作步驟5中,，可用Labeling Buffer作為回收標(biāo)記抗體的緩沖液,，也可使用其它任何緩沖液或保護(hù)劑,。

4.   本試劑盒未開封前的有效期為一年,，請(qǐng)?jiān)谟行趦?nèi)使用。

5.   本試劑盒提供的為10 kDa的Filtration tube,，標(biāo)記抗原或多肽請(qǐng)注意分子量的大小,。

6.   在步驟2中，標(biāo)記其它抗體時(shí),，我們應(yīng)先控制抗體的終濃度為2 mg/mL,，然后再根據(jù)抗體的量計(jì)算應(yīng)加入Reactive CY3的體積。

7.   要確定在偶聯(lián)中不引入游離氨基（Tris,，氨及疊氮鈉均可與活化CY3反應(yīng),，因此會(huì)降低蛋白與CY3的偶聯(lián)率）。

從2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域,、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù),，協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年，是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間,、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,，歡迎您與我們聯(lián)系。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)：