WB實驗注意細節(jié)

1. 細胞樣本，收細胞時,， PBS預(yù)冷,。

2. 組織樣本在取材時離體組織應(yīng)盡快凍存，可以置于液氮中迅速冷凍,，使用組織勻漿機進行勻漿時,， 一次研磨時間不宜過長,， 40s左右即可，如研磨不充分,，可再次研磨,。

3. PMSF應(yīng)注意搖勻至無結(jié)晶時方可使用。

4. 冰上裂解時,，可以晃動以使裂解充分,。

5. 裂解后的樣本盡量分裝保存，避免反復(fù)凍融,，盡快變性使用,。

6. BCA定量時盡量不使用96孔板最邊緣一圈（由于有些儀器邊緣效應(yīng)）。

7. 樣本可以根據(jù)具體情況稀釋合適的倍數(shù)再進行定量,，以免超出標曲范圍,。

8. BCA定量時，可以使用儀器中速輕微震蕩3-10秒,，混勻96孔板內(nèi)液體,，再進行測量。

9. 變性時,，注意加熱后小心管蓋爆開,。

10. 配膠時，板子一定徹底清洗干凈,。

11. 配膠的各組分注意充分混勻,。

12. 點樣時，多余的孔可以用loading buffer補齊,。

13. 轉(zhuǎn)膜時,， 一定帶手套才可以觸碰濾紙和膜，以防污染,。

14. 轉(zhuǎn)膜不可放反,，牢記黑膠白膜，注意電極正負極,。

15. 封閉時,， BSA或牛奶一定充分溶解。

16. 抗體種屬要注意區(qū)分,。

17. 洗膜要充分,。

18. 顯影液應(yīng)滴加均勻。

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