總膽固醇（TC）含量檢測試劑盒說明書

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定,。

規(guī)格：100T/96S 產品簡介：

微量法

總膽固醇（Total Cholesterol，TC）是指所有脂蛋白所含膽固醇的總和,，包括游離膽固醇和膽固醇酯,。

利用酯酶催化膽固醇酯水解生成游離膽固醇（FC）和游離脂肪酸（FFA），從而把膽固醇酯轉化為 FC,；進一步利用膽固醇氧化酶催化 FC 氧化,，生成△4-膽甾烯酮和 H2O2；最后利用過氧化物酶催化H2O2 氧化 4-氨基安替比林和酚,，生成紅色醌類化合物,，其在 500nm 有特征吸收峰，其顏色深淺與TC 含量成正比,。

試驗中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計/酶標儀,、天平、低溫臺式離心機,、微量玻璃比色皿/96 孔板,、可調式移液槍、

EP 管,、蒸餾水,、異丙醇,。產品內容：

提取液：異丙醇 100mL×1 瓶，自備,，4℃保存,；

工作液：液體 30mL×1 瓶，4℃保存,；

標準品：粉劑×1支,，10mg膽固醇，4℃保存,。臨用前加入517μL提取液,，振蕩溶解，即為50μmol/mL 的膽固醇標準溶液,。

操作步驟：

一,、樣本處理：

1.組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL

提取液）進行冰浴勻漿,。10000g,，4℃離心 10min，取上清置冰上待測,。

2.細菌,、真菌：按照細胞數量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w,，超聲 2 秒,，間隔 3 秒，總時間 3min）,；然后 10000g,，4℃離心 10min，取上清置于冰上待測,。

3.血清（漿）樣品：直接測定,。二、測定步驟：

1,、 分光光度計/酶標儀預熱 30min 以上,，調節(jié)波長至 500nm,，蒸餾水調零,。

2、 將 50μmol/mL 標準液用提取液稀釋為 2.5,、1.25,、0.625、0.3125,、0.15625,、0.078μmol/mL 的標準溶液備用,。

3、 操作表：(在離心管或 96 孔板中依次加入下列試劑)

第 1 頁 共 2 頁

測定管標準管空白管

樣品（µL）20--

標準溶液（μL）-20-

提取液（μL）--20

工作液（µL）180180180

充分混勻,，37℃靜置 15min,，反應完成后測定 500nm 處吸光值 A，分別記為 A 測定管,、A 標準管和 A 空白管,，△A=A 測定管-A 空白管，△A 標準=A 標準管-A 空白管,， 空白管只需測一次,。

總膽固醇含量計算

一、標準曲線的繪制：

以各個標準溶液的濃度為 x 軸,，其對應的△A 標準為 y 軸,，繪制標準曲線，得到標準方程 y=kx+b,， 將△A 帶入方程得到 x（μmol/mL）

二,、總膽固醇含量的計算：

1.血清（漿）中 FC 含量計算：

TC 含量（μmol/dL）=x×100。

2.組織中 FC 含量計算：

1.按樣本蛋白濃度計算

TC 含量（μmol/mg prot）=x×V 提取÷（Cpr×V 提?。?x÷Cpr,。

2.按樣本鮮重計算

TC 含量（μmol/g 鮮重）=x×V 提取÷W= x÷W

3.細胞、細菌中 TC 含量計算：

TC 含量(μmol/104 cell)=x×V 提取÷500=0.002x,。

100：1dL=100mL,；V 提取：加入樣本的提取液體積,，1mL,；W：樣本質量，g,；500:500 萬個細胞數量,。

注意事項

當△A 大于 1.5 時，建議將樣本用提取液稀釋后再進行測定,。

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