阿奇霉素

快速檢測試劑盒說明書

一,、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,，在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,，樣本中的殘留物阿奇霉素將和微孔條上預包被的

偶聯(lián)抗原競爭抗阿奇霉素抗體,，加入酶標記物后,，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物阿奇霉素的含量成

負相關(guān),，與標準曲線比較即可得出相應殘留物阿奇霉素的含量,。

二、試劑盒特性

產(chǎn)品貨號：       YJ63A\J1

靈 敏 度：       0.05ppb

孵育溫度：       25℃

孵育時間：       30min～15min

樣本檢測下限

組   織     ······································· 0.5ppb

雞   蛋     ······································· 0.5ppb

牛   奶     ······································· 0.5ppb

交叉反應率

阿奇霉素（Azithromycin） ···················· 100%

紅霉素（Erythromycin） ···················· <1%

泰勒菌素（Tylosin） ···························· 30%

替米考星（Tilmicosin） ························ 23%

樣本回收率

組   織  ·································  70%~120%

三,、試劑盒組成

四、所用儀器,、試劑

具備的儀器：

酶標儀,、均質(zhì)器、振蕩器,、離心機,、刻度移液管、天平（感量0.01g）,、恒溫箱,、打印機

微量移液器：單道 20～200µl、單道100～1000µl,、多道30～300 µl

試      劑：氫氧化鈉,、甲醇

五、樣本前處理步驟

樣本處理前須知

（a）實驗中必須使用

一次性吸頭,，吸取不同試劑時要更換吸頭

（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結(jié)果,。

樣本前處理需配制：

配液1  提取液A

       1份20X提取液A+ 19份去離子水混合,。

配液2  提取液B

       1份2X提取液B+ 1份去離子水混合。

配液3  1M  NaOH溶液

       稱取4g氫氧化鈉固體加去離子水定容至100ML,。

配液4  10%甲醇

       1份無水甲醇+ 9份去離子水混合

樣本處理：

（a）組織樣本的處理方法

1,、 稱2±0.05g均質(zhì)后的組織至50ml離心管中,，加入3ml提取液A，渦旋振蕩3min,；

2,、再加入600µl 1M  NaOH溶液和2.4ml 提取液B，渦旋振蕩3min,；室溫4000r/min以上離心5min,；

3、取50 µl上層液體用于分析,。（注：離心后若有脂肪層,，去除脂肪層或撥開脂肪層，取清澈液體進行分析）,。

樣本稀釋倍數(shù)：  4倍

此方法為多合一（組合Ⅱ）處理方法,，樣本可合一處理。

（b）組織（雞肉,、鴨肉）,、雞蛋、牛奶樣本處理方法

1,、 稱取均質(zhì)后的新鮮樣本1±0.05g于50ml離心管中,，加入5ml 10%甲醇，振蕩3min,，室溫4000r/min以上離心5min,；

2、 取50 µl上清用于分析,。

樣本稀釋倍數(shù):  5倍

六,、 酶標免疫分析程序:

測定前應須知：

1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫（20-25℃）,。

2,、 使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。

3,、 在ELISA分析中的再現(xiàn)性,，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點,。

4,、 所有恒溫孵育過程，避免光線照射,，用蓋板膜蓋住微孔板,。

操作步驟：

1、 從2～8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,，室溫（20-25℃）平衡30min以上,，注意每種液體試劑使用前均須搖勻,。

2、 取出框架及需要數(shù)量的微孔,，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃,。

3,、 配液：洗滌液配制

將15ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水

按照1:19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子

水），或按所需用量配制洗滌液,。

4,、 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行,，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置,。

5、 加標準品/樣本50µl/孔到各自的微孔中,，然后加酶標記物50µl/孔,，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜蓋板,，輕輕振蕩混勻,，25℃環(huán)境反應30min

6、 將孔內(nèi)液體甩干,，用洗滌液250µl/孔洗板4～5次,，每次間隔15-～30秒，用吸水紙拍干（拍干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）,。

7,、 顯色：加入底物A液50µl/孔，再加入底物B液50µl/孔,，輕輕振蕩混勻,，25℃環(huán)境中避光顯色15min。

8,、 測定：加入終止液50µl/孔,，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測,，5min內(nèi)讀數(shù)）,，測定每孔OD值。

七,、結(jié)果判定

結(jié)果判定有兩種方法,，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法,。注意樣本吸光度值與其所含阿奇霉素量成負相關(guān),。

1,、粗略判定：

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3,，樣本2的吸光度值為1.0,，標準液吸光度值分別是：0ppb為2.243； 0.05ppb為1.816,；0.15ppb為1.415,；0.45ppb為0.74；1.35ppb為0.313,；4.05ppb為0.155,。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb～4.05ppb；樣本2的濃度范圍是0.15ppb～0.45ppb,，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中阿奇霉素實際濃度,。

2、定量分析

（1）百分吸光率的計算,，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準（0標準）的吸光度值,，再乘以100%，即

百分吸光率（%）＝B×100%

B0

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

（2）標準曲線的繪制與計算

以標準品百分吸光率為縱坐標,，以阿奇霉素標準品濃度（ng/ml）的半對數(shù)為橫坐標,，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中阿奇霉素實際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,，更便于大量樣本的準確,、快速分析。（歡迎來電索?。?/p>

八,、 注意事項

1、 室溫低于25℃或試劑及標本未回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低,。

2,、 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會伴隨著標準曲線不成線性,，重復性不好的現(xiàn)象,。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。

3,、 混合要均勻,，否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。

4,、 反應終止液為2M硫酸,，避免接觸皮膚,。

5、 不要使用過了有效日期的試劑盒,；稀釋或攙雜使用會引起靈敏度,、OD值變化；不要交換使用不同批號的盒中試劑,。

6,、 不用的微孔板放進自封袋重新密封；標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,，因此要避免直接暴露在光線下,。

7,、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),，應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時,，表示試劑可能變質(zhì),。

8、 該試劑盒最佳反應溫度為25℃,，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化,。

九、儲藏條件和保質(zhì)期

1,、 儲藏條件：試劑盒于2～8℃保存,，不要冷凍。

2,、 保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年,，生產(chǎn)日期見包裝盒。

提示：酶標板真空包裝袋若有漏氣,，酶標板仍然正常有效,，不影響實驗結(jié)果，請放心使用,。

實驗技術(shù)服務：