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所 在 地上海市
更新時間:2024-08-30 16:33:45瀏覽次數(shù):2173次
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堿性磷酸酶染色實驗服務
堿性磷酸酶染色實驗技術簡介:
堿性磷酸酶(AKP) 的顯示方法早由Gomeri (1939) 提出,現(xiàn)在這種方法稱為Gomeri法,。堿性磷酸酶是指磷酸單酯酶I,它能在pH8. 6~10.0的適條件下分解磷酸單酯,對于與磷酸相接的醇基沒有特異性,,Gomeri法是讓該酶在堿性條件下,,分解甘油磷酸鈉,,產(chǎn)生磷酸根,。
堿性磷酸酶染色實驗技術原理:
在一定條件下,,使細胞中的酶作用于酶的底物,使其產(chǎn)物在原地進行捕捉,、沉淀轉化為有色產(chǎn)物,。細胞組織中的堿性磷酸酶在堿性(PH9.0- 9.6)環(huán)境下使作用液中的底物(a- 磷酸萘酚鈉)水解,產(chǎn)生出a蔡酚,,然后再與偶氮鹽偶聯(lián),,生成不溶性的耐曬染料(終產(chǎn)物的顏色因所用偶氮鹽的品種不同而有所不同)。
實驗操作流程:
1,、取材、固定,、包埋,、切片;
2.取已粘好烘干的切片兩塊,放入二甲苯(一)→二甲苯(二) (各3-4分鐘) 的染缸中進行脫蠟,,再經(jīng)100%乙醇(一)- +100%乙醇(二) - -95%乙醇- -90%乙醇- -70%乙醇- -30%乙醇- +z水,。 每級各一分鐘,在移切片時,,用鑷子夾住切片震蕩并提起,,放下反復幾次,在移入下-染缸邊緣前稍停留,。讓溶液滴凈后,再入下一染缸,,以免把上一染缸溶液過多帶入下-染缸,而影響切片質量;
3.將其中一塊切片以蠟筆作-標記(用作對照組切片),,放入沸水中煮沸5分鐘;
4.將兩塊切片均放入AKP作用液中孵育30-60分鐘,,作用液要事先預熱到37"C,水浴中進行:
5、取出切片在蒸餾水中洗滌;
6,、放入硝酸鈷溶液2-3分鐘;
7.蒸餾水沖洗干凈,,否則切片易被污染,影響定位;
8,、切片浸入硫化銨中2-3分鐘;
9.蒸餾水沖洗干凈;
10.經(jīng)各級酒精脫水,。即30%乙醇- -70%乙醇- -90%乙醇- -950%乙醇- -100%乙醇 (二)- -100%乙醇 (一),,各級一分鐘在顯微鏡下觀察,細胞中有黑色沉淀存在的地方,,就表明有酶的存在,。煮沸的對照切片無黑色沉淀。
實驗代做服務:
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