網(wǎng)狀纖維染色銀染實(shí)驗(yàn)服務(wù)

實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)介:網(wǎng)狀纖維(reticular fiber)網(wǎng)狀纖維在疏松結(jié)締組織中含量較少,纖維較細(xì),，有分支,彼此交織成網(wǎng)狀,。用浸銀法可將纖維染成黑色,，故又稱(chēng)嗜銀纖維(argyrophilic fiber),。電鏡觀(guān)察，網(wǎng)狀纖維具有等間距的橫紋結(jié)構(gòu),，其化學(xué)成分也是膠原蛋白,，和膠原纖維相似。網(wǎng)狀纖維的嗜銀性是由于包在原纖維上的糖蛋白所致,。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理:氨銀液被組織吸咐與組織中的蛋白結(jié)合,，經(jīng)甲醛還原成黑色的金屬銀沉積于組織內(nèi)及表面。用氯化金調(diào)色后,，再用硫代硫酸鈉液洗去未還原的銀鹽,從而將組織內(nèi)的網(wǎng)狀纖維清晰地顯示出來(lái),。

實(shí)驗(yàn)操作流程:

1、切片脫蠟至水,，蒸餾水洗,

2,、用0.5%高 錳酸鉀氧化5min,

3、自來(lái)水洗,，繼用蒸餾水洗,

4,、用2%草酸漂白切片2min,

5、自來(lái)水洗,，蒸餾水洗,

6,、2%硫酸鐵鈹媒染5min,

7、水洗,，蒸餾水洗,

8,、滴入氨性銀溶液浸染3 -5min,

9、蒸餾水洗數(shù)次, 

10,、 10%甲醛液還原5-10min,

11,、水洗2min,

12、用核固紅染色10-15min,

13,、水洗10min, 各級(jí)酒精脫水,

14,、 常規(guī)透明，中性樹(shù)膠封固,。

結(jié)果:網(wǎng)狀纖維黑色,，核紅色,膠原纖維黃棕色,。

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):

客戶(hù)提供:

1、組織樣品:新鮮組織放入液氮或80度保存,，組織不少于100mg;

2,、培養(yǎng)細(xì)胞:通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2x106個(gè)細(xì)胞于EP管,加入0 .5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，溝后保存于冰箱(-80°C, 避免反復(fù)凍融) ;

3,、血液細(xì)胞標(biāo)本:以抗凝管保存血樣或以淋巴細(xì)胞分離液分離細(xì)胞后加入05ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑,保存(-80°C可長(zhǎng)期保存,避免反復(fù)凍融) ;

4,、血清或細(xì)胞培養(yǎng)液標(biāo)本:離心去掉雜質(zhì)后取上清入EP管,保存(49C可保存15-20天, -80°C可長(zhǎng)期保存，避免反復(fù)凍融) ;

5,、石蠟切片,，冰凍切片以及細(xì)胞爬片，涂片等,。

6,、樣本運(yùn)輸:可選擇以下任何一種方式寄送標(biāo)本

組織樣本、細(xì)胞樣本以干冰運(yùn)輸或加入蛋白保護(hù)劑后,，加冰袋寄送;

細(xì)胞樣本也可直接寄送培養(yǎng)瓶(密封保證不污染,、培養(yǎng)液不漏出) ;

血清或上清液直接加冰袋寄送(視快遞時(shí)效一般控制在2-3天內(nèi))，

交付標(biāo)準(zhǔn):

1,、圖片;

2,、完整項(xiàng)目報(bào)告(材料、試劑,、儀器,、方法、數(shù)據(jù)分析,、實(shí)驗(yàn)結(jié)果),。

其他:

1、所使用的玻璃儀器,，須用清潔液處理,。

2、配制氨銀溶液時(shí),，氨水加入的量不能過(guò)多或不足,，過(guò)多感應(yīng)下降，會(huì)使液體過(guò)堿,，滴染時(shí),，切片容易脫落，過(guò)少則感應(yīng)上升,，浸染效果不佳,，不好掌握。

3,、配制氨銀液時(shí),，有可能用玻璃蒸餾水,。

4、使用的化學(xué)試劑應(yīng)盡量用分析純以上,。

5,、切片氧化漂白應(yīng)*，不能使殘存的福爾馬林留于片上,，否則將導(dǎo)致過(guò)早還原而使浸染不均勻,。

6,、如果有某種原因而導(dǎo)致切片脫落時(shí),，應(yīng)使用涂膠的載片，以增加附貼性,。

7,、如有可能，氨銀溶液以新配為佳,，但也可保存于4°C冰箱中達(dá)一 個(gè)月左右,這種液體易揮發(fā),，用后即須蓋緊，當(dāng)沉淀物出現(xiàn)時(shí),，該溶液應(yīng)拋棄,。

8、應(yīng)秀氯化金調(diào)色時(shí),，可將膠原纖維著染的黃棕色去除掉,。

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