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產(chǎn)品型號(hào)
品 牌其他品牌
廠商性質(zhì)生產(chǎn)商
所 在 地上海市
更新時(shí)間:2024-08-30 14:54:35瀏覽次數(shù):3206次
聯(lián)系我時(shí),,請告知來自 化工儀器網(wǎng)Northern Blot印跡雜交檢測實(shí)驗(yàn)服務(wù)
質(zhì)粒構(gòu)建實(shí)驗(yàn)周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
產(chǎn)地類別 | 國產(chǎn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè) |
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雙熒光素酶報(bào)告基因檢測
實(shí)驗(yàn)意義
1.可廣泛引用與miRNA的靶基因檢測,,可以判斷miRNA是否與靶基因結(jié)合,,也可以定量反映miRNA對(duì)目的基因的抑制作用。
2.轉(zhuǎn)錄因子(反式作用因子)存在DNA結(jié)合域,,可以與靶標(biāo)啟動(dòng)子中的特異序列(順式作用元件)進(jìn)行共價(jià)結(jié)合,,從而調(diào)控基因的表達(dá),雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)是檢測這類轉(zhuǎn)錄因子與基因特異序列的重要手段,,是真核基因表達(dá)調(diào)控研究的常用方法,。
實(shí)驗(yàn)原理及流程
雙熒光素酶是指螢火熒光素酶和海腎熒光素酶,螢火蟲熒光素酶呈黃綠色,,波長550-570nm, 海腎熒光素酶呈藍(lán)色,,波長為480nm。報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)是將靶標(biāo)啟動(dòng)子的特定片段插入熒光素酶表達(dá)序列的前方,,構(gòu)建帶有靶標(biāo)啟動(dòng)子片段的雙報(bào)道基因質(zhì)粒,,然后將待測的轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)質(zhì)粒與報(bào)告基因質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞或者其他相關(guān)細(xì)胞系,如果轉(zhuǎn)錄因子能夠激活
啟動(dòng)子,,則報(bào)告基因表達(dá),,熒光素酶的表達(dá)量與轉(zhuǎn)錄因子作用強(qiáng)度成正比。加入熒光素酶底物即可根據(jù)熒光強(qiáng)度檢測轉(zhuǎn)錄因子與靶啟動(dòng)子之間是否存在相互作用,。熒光素酶報(bào)告基因可構(gòu)建在同一質(zhì)?;蛘邩?gòu)建為兩個(gè)質(zhì)粒,即轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒與靶啟動(dòng)子片段質(zhì)粒,。
實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)
實(shí)驗(yàn)周期: 4-6周
交付標(biāo)準(zhǔn):雙熒光素酶報(bào)告基因檢測,、鑒定結(jié)果報(bào)告、分析報(bào)告,、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(試劑,、 耗材.實(shí)驗(yàn)步驟)、原始數(shù)據(jù)等
需確認(rèn)的信息
1.基因與啟動(dòng)子信息
2.具體分許信息.
3.是否提供質(zhì)粒?
參考文獻(xiàn)
[1] Miraglia E , Nylen, Frank, Johansson K,,et al. Entinostat up-regulates the CAMP gene encoding LL-37 via activationof STAT3 and HIF-1a transcription factors[J]. Scientific Reports, 2016, 6:33274.
[2] Azimzadeh P,,Olson J A,Balenga N . Reporter gene assays for investigating GPCR signaling.[J]. Methods Cell Biol,2017:89-99.
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