產(chǎn)品名稱(chēng)：肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱(chēng)：PCR Detection Kit for BotulinumNeurotoxin Genes Type E/F

產(chǎn)品編號(hào)與包裝規(guī)格：

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：本試劑盒基于PCR技術(shù)，并適用于食品中肉毒梭菌E/F型毒素基因的檢測(cè),。

肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理：利用2對(duì)特異性引物和PCR反應(yīng)所需其他試劑,，如反應(yīng)緩沖液,、dNTPs以及Taq DNA聚合酶等,，加入待檢DNA模板樣品,，即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),。經(jīng)比對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物目標(biāo)條帶即可判定E/F型肉毒梭菌毒素基因。

產(chǎn)品特點(diǎn)：
      1. 快速簡(jiǎn)便：將酶,、引物等反應(yīng)組分混勻后進(jìn)行干粉化處理,，增加試劑穩(wěn)定性，使用時(shí)減少溶液配制步驟,，更為便捷,，整個(gè)檢測(cè)反應(yīng)可在3 h內(nèi)完成；
      2. 特異性高：按照GB 4789.12?2016《食品微生物學(xué)檢驗(yàn)肉毒梭菌及肉毒毒素檢驗(yàn)》提供的目標(biāo)基因引物,，保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性,；
      3. 判讀簡(jiǎn)單：擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和紫外儀觀(guān)察目標(biāo)條帶即可判別，直觀(guān)方便,。

儲(chǔ)存條件與保質(zhì)期：2~8℃條件下儲(chǔ)存,，有效期為12個(gè)月。

所需其他材料和適用儀器：
      1. PCR儀器,、高速離心機(jī),、電泳儀、水平電泳槽,、紫外儀,、移液器、移液槍頭及離心管等,；
      2. 瓊脂糖,、溴化乙錠（EB）或其他核酸染料。

肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品組分：

肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR檢測(cè)試劑盒使用指南：

1,，樣品前處理

   1) 參照GB 4789.12?2016,，挑取可疑菌落或待鑒定菌株接種TPGY，35℃±1℃厭氧培養(yǎng)24 h,。吸取TPGY培養(yǎng)液1 mL至無(wú)菌離心管中,，12000 r/min離心2 min，棄上清,，加入30 μL裂解液,，充分懸浮，轉(zhuǎn)移至0.2 mL無(wú)菌離心管中,，輕彈管壁消除氣泡,，99℃加熱10 min；

   2) 12000 r/min離心15 min,，上清即為粗提的DNA,，可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無(wú)菌離心管中，在-20℃下可長(zhǎng)期保存,。

2,，加樣,、反應(yīng)

   1) 首-次使用時(shí)，分別加入80 μL超純水至陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照管中,，充分溶解,，-20℃存儲(chǔ)待用；
   2) 取出干粉試劑,，按照需求分別剪取n個(gè)檢測(cè)試劑管（n=待檢測(cè)樣品數(shù)+1管陽(yáng)性對(duì)照+1管陰性對(duì)照）,，每管加入18 μL復(fù)溶液，充分溶解后待用,；
   3) 向上述已加入復(fù)溶液的n個(gè)反應(yīng)管中分別加入待測(cè)樣品核酸,、陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各2 μL,，緊蓋后置于PCR儀中按設(shè)定的反應(yīng)程序進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),；
   4) PCR 反應(yīng)程序如下：

3，結(jié)果判讀：反應(yīng)后每管中加入4 μL6×Loading buffer,，混勻,，并取8 μL經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，在紫外儀下觀(guān)察,，陰性對(duì)照無(wú)條帶擴(kuò)增,，陽(yáng)性對(duì)照中出現(xiàn)目標(biāo)條帶（參照?qǐng)D1），PCR試驗(yàn)結(jié)果成立,。根據(jù)每個(gè)樣品對(duì)應(yīng)的反應(yīng)產(chǎn)生的目標(biāo)條帶,，即可判斷肉毒梭菌毒素基因類(lèi)型。若陰陽(yáng)性對(duì)照管反應(yīng)結(jié)果不符,，則本次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效,，應(yīng)重新檢測(cè)或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系。

肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR檢測(cè)試劑盒用于食品中肉毒梭菌E/F型毒素基因的檢測(cè),。

肉毒梭菌E/F型毒素基因PCR檢測(cè)試劑盒用于食品中肉毒梭菌E/F型毒素基因的檢測(cè),。