產(chǎn)品名稱：ETEC多重PCR檢測試劑盒
英文名稱：Multiplex PCR Detection Kit for ETEC

注：ETEC表示產(chǎn)腸毒素大腸埃希氏菌（Enterotoxigenic Escherichia coli）,。

產(chǎn)品編號與包裝規(guī)格：

產(chǎn)品簡介：本試劑盒基于PCR技術(shù),，并適用于食品中ETEC的檢測。

ETEC多重PCR檢測試劑盒檢測原理：利用4對特異性引物和PCR反應(yīng)所需其他試劑,，如反應(yīng)緩沖液,、dNTPs以及Taq DNA聚合酶等，加入待檢核酸樣品,，即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增反應(yīng),。經(jīng)比對擴(kuò)增產(chǎn)物目標(biāo)條帶組合即可判定所對應(yīng)的致瀉大腸埃希氏菌類別。

產(chǎn)品特點：
      1. 快速簡便：將酶,、引物等反應(yīng)組分混勻后進(jìn)行干粉化處理,，增加試劑穩(wěn)定性，使用時減少溶液配制步驟，更為便捷,，整個檢測反應(yīng)可在3 h內(nèi)完成,；
      2. 特異性高：由GB 4789.6?2016《食品微生物學(xué)檢驗致瀉大腸埃希氏菌檢驗》提供的目標(biāo)基因引物，保證擴(kuò)增反應(yīng)的高度特異性,；
      3. 判讀簡單：擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳和紫外儀觀察目標(biāo)條帶即可判別,，直觀方便。

儲存條件與保質(zhì)期：2~8℃條件下儲存,，有效期為12個月,。

所需其他材料和適用儀器：
      1. PCR儀器、高速離心機(jī),、電泳儀,、水平電泳槽、紫外儀,、移液器、移液槍頭及離心管等,；
      2. 瓊脂糖,、溴化乙錠（EB）或其他核酸染料。

ETEC多重PCR檢測試劑盒產(chǎn)品組分：

ETEC多重PCR檢測試劑盒使用指南：

1,，樣品前處理

   1) 參照GB 4789.6?2016,，使用1 μL接種環(huán)刮取營養(yǎng)瓊脂平板或斜面上培養(yǎng)18 h~24h的菌落，懸浮到含30 μL裂解液的無菌離心管中,，充分懸浮菌體,，輕彈管壁消除氣泡，99℃加熱10 min,；

   2) 12000 r/min離心15 min,，上清即為粗提的DNA，可轉(zhuǎn)移至0.2 mL無菌離心管中,，在-20℃下可長期保存,。

2，加樣,、反應(yīng)

   1) 首-次使用時,，分別加入80 μL超純水至陽性對照和陰性對照管中，充分溶解,，-20℃存儲待用,；
   2) 取出凍干粉試劑ET1和ET2，按照需求分別剪取n個檢測試劑管（n=待檢測樣品數(shù)+1管陽性對照+1管陰性對照）,，每管加入18 μL復(fù)溶液,，充分溶解后待用；
   3) 向上述已加入復(fù)溶液的n個反應(yīng)管中分別加入待測樣品核酸、陰性對照,、陽性對照各2 μL,，緊蓋后置于PCR儀中按設(shè)定的反應(yīng)程序進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)；
   4) PCR 反應(yīng)程序如下：

3,，結(jié)果判讀：反應(yīng)后每管中加入4μL6 ×Loading buffer,，混勻，并取8 μL經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳,，在紫外儀下觀察,，陰性對照僅有uidA條帶擴(kuò)增，陽性對照中出現(xiàn)目標(biāo)條帶（參照圖1）,，PCR試驗結(jié)果成立,。根據(jù)每個樣品對應(yīng)的凍干粉試劑ET1和ET2反應(yīng)產(chǎn)生的目標(biāo)條帶種類，并查找該目標(biāo)條帶組合所對應(yīng)的致瀉大腸埃希氏菌類別（參照表1）,，即為檢測結(jié)果,。若陰陽性對照管反應(yīng)結(jié)果不符，則本次檢測結(jié)果無效,，應(yīng)重新檢測或與產(chǎn)品技術(shù)支持聯(lián)系,。

ETEC多重PCR快速檢測試劑盒用于食品中產(chǎn)腸毒素大腸埃希菌的定性檢測。

ETEC多重PCR快速檢測試劑盒用于食品中產(chǎn)腸毒素大腸埃希菌的定性檢測,。