使用目的：
本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中巴爾通體（Bartonella）表達(dá),。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠巴爾通體（Bartonella）表達(dá),。用純化的小鼠巴爾通體（Bartonella）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，可與樣品中巴爾通體（Bartonella）相結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP 標(biāo)記的巴爾通體（Bartonella）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD值）,，與CUTOFF 值相比較,，從而判定標(biāo)本中小鼠巴爾通體（Bartonella）的存在與否。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1 瓶 8 陽性對照 0.5ml×1 瓶
3 酶標(biāo)包被板 12 孔×8 條 9 陰性對照 0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進行提取,，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
操作步驟
1. 編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號,，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2 孔、陽性對照2 孔,、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照50μl,。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,，
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去,，如此重復(fù)5 次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15 分鐘以內(nèi)進行,。
操作程序總結(jié)：
計算和結(jié)果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為巴爾通體（Bartonella）陰性
陽性判定：樣品OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為巴爾通體（Bartonella）陽性。
注意事項
1．操作嚴(yán)格按照說明書進行,，本試劑不同批號組分不得混用,。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。
4． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
5．底物請避光保存,。
6．試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)，使用雙波長檢測時,，參考波長為630nm
7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M 的硫酸,，使用時必須注意安全,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6 個月.
提供商 |
北京索萊寶科技有限公司 |
下載次數(shù) |
489次 |
資料大小 |
32KB |
資料類型 |
WORD 文檔
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資料圖片 |
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